基因工程的操作-文庫吧
2024-12-28 17:55 本頁面
【正文】 5℃ ~60℃ ，使兩種 引物 分別與 模板 DNA的一端互補序列 互補配對 。 （退火） （ 3）將溫度升至 70℃ ~75℃ ，在 耐高溫的 DNA聚合 酶催化 作用下，使 DNA鏈延伸。 （延伸） 利用 PCR技術擴增目的基因 PCR擴增儀 人工合成 目的基因 基因較小，核苷酸序列已知，可以利用 DNA合成儀人工合成 . 二、 基因 表達載體 的構建 基因表達載體 的模式圖 抗生素 抗性 基因 將生物的所有 DNA直接導入受體細胞不是更簡便嗎？ 表達載體的構建使目的基因在受體細胞中 穩(wěn)定存在，并且以遺傳給下一代 ，同時是目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。 基因表達載體組分 目的基因 啟動子： 是一段有特殊結構的 DNA片段，位于基因的首段，它是 RNA聚合酶 識別的結合部位 ，有了它才能驅動基因轉錄 mRNA。 終止子： 也是一段有特殊結構的 DNA片段，位于基因的末端，使 轉錄在這里終止。 標記基因： 是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。 ① 載體 與 表達載體 的區(qū)別：二者都有標記基因 和復制原點兩部分 DNA片段。表達載體在載 體基礎上增加了目的基因、啟動子、終止子 三部分結構 . ② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割載體，又 用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩 種酶作用的化學鍵都是磷酸二酯鍵 . ③ 啟動子、終止子 對于目的基因表達必不可少 . ④ 目的基因不能單獨進入受體細胞， 必需以表 達載體的方式攜帶進去。 注意 三、 將 目的基因 導入 受體 A、將目的基 因導入 植物細胞 農桿菌轉換法 （最常用） 基因槍法 花粉管通道法 農桿菌轉換法 農桿菌： 是一種在土壤中生活的微生物，能在自然界感染 雙子葉植物和裸子植物 ，而對大多數單子葉植物 沒有感染能力。 原理： 當植物受到損傷時，傷口處的細胞會分泌大量的 酚類化合物 ，吸引龍桿菌移向這些細胞，這時龍桿菌的 Ti質粒 上的 TDNA（可轉移的 DNA)可轉移至 受體細胞， 并且整合到 受體細胞染色體的 DNA上 。 轉化過程 基因槍法 原理： 利用 壓縮氣體 產生的動力，將包裹在金屬顆粒表面的表達載體 DNA打入受體細胞中，使目的基因與其整合并表達的方法。 應用： 單子葉植物 ，但成本較高 花粉管通道法 B、將目的基因導入 動物細胞 方法： 顯微注射法 步驟： （ 1）首先將含有目的基因的表達載體 提純 。 （ 2）從雌性體內取出受精卵，采用 顯微注 射儀 進行顯微注射。
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