基因工程的基本操作程序(ppt55頁)(已修改)
2025-01-15 17:38 本頁面
【正文】 1． 2 基因工程的基本操作程序 學(xué)習(xí)導(dǎo)航 。 [難點 ] 。 [重點 ] 。 。 [要點 ] 新知初探思維啟動 一 、 目的基因的獲取 1..從基因文庫中獲取目的基因 將含有某種生物的不同 ______的 DNA片段導(dǎo)入受體菌的群體中儲存 ， 各個受體菌分別含有這種生物不同的基因 ， 稱為基因文庫 。 基因 基因文庫包括兩種： ________文庫，即包含一種生物所有基因的文庫； __________文庫 ,即只包含一種生物的一部分基因的文庫，如 cDNA文庫。 PCR技術(shù)擴增目的基因 (1)PCR的含義：是一項在生物 ______復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù) 。 (2)目的：短時間內(nèi)大量擴增目的基因 。 (3)原理： ________________。 基因組 部分基因 體外 DNA雙鏈復(fù)制 (4)過程： 第一步：加熱至 90 ～95℃ ,_______________ 。 第二步：冷卻至 _________℃ ， 引物與兩條單鏈 DNA相應(yīng)互補序列結(jié)合； 第三步：加熱至 70～ 75℃ ， 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶 )從引物起始進行互補鏈的合成 。 如此重復(fù)循環(huán)多次 。 (5)特點：指數(shù)形式擴增。 DNA解鏈為單鏈 55～ 60 想一想 1． PCR過程中 ， 需要解旋酶嗎 ？ 所需要的DNA聚合酶應(yīng)具有什么特點 ？ 【 提示 】 PCR過程中， DNA雙鏈解開是在高溫下完成的，不需要解旋酶；由于 PCR過程溫度較高，所以需要能耐高溫的 DNA聚合酶。 如果基因比較 ___,核苷酸序列又已知 ,也可以通過 DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成 。 二 、 基因表達載體的構(gòu)建 基因表達載體的組成：必須有啟動子、____________、終止子以及標記基因等。 小 目的基因 三 、 將目的基因?qū)胧荏w細胞 1..轉(zhuǎn)化 ___________進入受體細胞內(nèi) ， 并且在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程 ， 稱為轉(zhuǎn)化 。 (1)將目的基因?qū)胫参锛毎翰捎米疃嗟姆椒ㄊ?________轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法。 目的基因 農(nóng)桿菌 (2)將目的基因?qū)雱游锛毎鹤畛Ｓ玫姆椒ㄊ?__________技術(shù) 。 此方法的受體細胞多是 _________。 (3)將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ǎ? ① 用 _______處理細胞 ， 使細胞處于能吸收周圍環(huán)境中 DNA分子的生物狀態(tài) ,這種細胞稱為 ________細胞 。 ②將重組表達載體 DNA分子與感受態(tài)細胞混合，在一定溫度下完成轉(zhuǎn)化過程。 顯微注射 受精卵 Ca2＋ 感受態(tài) 想一想 2． 從細胞器的功能上分析 ， 若通過基因工程生產(chǎn)人的糖蛋白 ， 可以用大腸桿菌嗎 ？ 【 提示 】 不可以，糖蛋白上的糖鏈是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體上加工完成的，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體存在于真核細胞中，大腸桿菌是原核生物，細胞中不含有這兩種細胞器。 四 、 目的基因的檢測與鑒定 1..首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入了 _________, 方 法 是 采 用______________技術(shù) 。 ________,方法是采用 __________技術(shù) 。 目的基因 DNA分子雜交 mRNA 分子雜交 ________,從 分 子 水 平 檢 測 的 方 法
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