【正文】 (c)P．Berg (d)B．McClintock2． 第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83． 關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有( )不太恰當(dāng)。 (a)Sau3A I (b)E．coRI (c)hind III (d)Sau 3A112．限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性是指：( )(a)在非常規(guī)條件下，識別和切割序列發(fā)生變化的活性。 (a)5，3，合成酶， (b)3，5，外切酶 (c)5，3，外切酶 (d)轉(zhuǎn)移酶22． 下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒(relaxed plasmid)性質(zhì)的描述中，( )是不正確的 (a)質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機制的制約， 因而有較多的拷貝數(shù) (b)可以在氯霉素作用下進行擴增 (c)通常帶有抗藥性標(biāo)記 (d)同嚴(yán)緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子 23． 基因工程中所用的質(zhì)粒載體大多是改造過的，真正的天然質(zhì)粒載體很少，在下列載 體中只有( )被視為用作基因工程載體的天然質(zhì)粒載體 (a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl8 24． 下列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大?( ) (a)質(zhì)粒 (b)黏粒 (c)酵母人工染色體(YAC) (d) l噬菌體 (e) cDNA表達(dá)載體 25. 松弛型質(zhì)粒： ( ) (a)在寄主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多 (b)可用氯霉素擴增 (c)一般沒有選擇標(biāo)記 (d)上述(a)、(b)兩項正確 26．Col El是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒： ( ) (a)是松弛復(fù)制型 （b)具有，四環(huán)素抗性 (c)能被氯霉素擴增 (d)能產(chǎn)生腸桿菌素27．同一種質(zhì)粒DNA，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：( ) (a)OCDNASCDNALDNA (b)SCDNALDNAOCDNA (c)LDNAOCDNASCDNA (d)SCDNAOCDNALDNA28．pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，含有兩個抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自： ( ) (a)ColEl (b)Ri質(zhì)粒 (c)pSCl01 (d)pUCl829．關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確?( ) (a)在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機制 (b)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點 (c)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶 (d)在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速率30．能夠用來克隆32kb以下大小的外源片段的質(zhì)粒載體是( ) (a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid31．第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti質(zhì)粒：( ) (a)可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細(xì)胞中 (b)作為雙鏈DNA被轉(zhuǎn)移 (c)在植物中導(dǎo)致腫瘤 (d)介導(dǎo)冠癭堿的合成，作為細(xì)菌的營養(yǎng)物和植物的生長激素 (e)需要細(xì)菌的vir基因幫助轉(zhuǎn)移 (f)在植物細(xì)胞中作為染色體外質(zhì)粒33．黏粒(cosmid)是一種人工建造的載體，( ) (a)它具有COS位點，因而可進行體外包裝 (b)它具有質(zhì)粒DNA的復(fù)制特性 (c)進入受體細(xì)胞后，可引起裂解反應(yīng) (d)進入受體細(xì)胞后，可引起溶源化反應(yīng)34．有兩種確定核酸中核苷酸序列的方法：化學(xué)序列分析法(MaxamGlbert)和酶學(xué)序列分析法(Sanger)。這樣既減少純化步驟，也節(jié)約了開支。在下列文庫中， ( )屬cDNA文庫 (a) YAC文庫 (b) MAC文庫 (c) 扣減文庫 (d) BAC文庫40．下面關(guān)于多克隆位點(multiple clone site,MCS)的描述，不正確的—句是( ) (a)僅位于質(zhì)粒載體中 (b)具有多種酶的識別序列 (c)不同酶的識別序列可以有重疊 (d)一般是人工合成后添加到載體中41．在cDNA技術(shù)中，所形成的發(fā)夾環(huán)可用( ) (a)限制性內(nèi)切核酸酶切除 (b)用3185。外切核酸酶切除42．在DNA的酶切反應(yīng)系統(tǒng)中，通常：( ) (a)用SSC緩沖液 (b)加入Mg2+作輔助因子 (c)加入BSA等保護劑 (d)上述說法中，有兩項是正確的43． 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且( ) (a)產(chǎn)生新切點 (b)易于回收外源片段 (c)載體不易環(huán)化 (d)影響外源基因的表達(dá)44．在下列表型中，( )是基因工程上理想的受體菌表型 (a)r+m+rec* (b)rmrec (C)rmrec+ (d)r+m+rec45．關(guān)于DNA接頭在基因工程中的作用，下列說法中哪一項不正確?( ) (a)給外源DNA添加適當(dāng)?shù)那悬c (b)人工構(gòu)建載體 (c)調(diào)整外源基因的可讀框 (d)增加調(diào)控元件46．cDNA文庫包括該種生物的( ) (a)某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 (b)所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 (c)所有結(jié)構(gòu)基因 (d)內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)47．下列關(guān)于建立cDNA文庫的敘述中，哪一項是錯誤的?( ) (a)從特定組織或細(xì)胞中提取DNA或RNA (b)用反轉(zhuǎn)錄酶合成mRNA的對應(yīng)單鏈DNA (c)以新合成的單鏈DNA為模板合成雙鏈DNA (d)新合成的雙鏈DNA甲基化 48．下列對黏性末端連接法的評價中，哪一項是不正確的? ( ) (a)操作方便 (b)易于回收片段 (c)易于定向重組 (d)載體易于自身環(huán)化，降低重組率49．關(guān)于感受態(tài)細(xì)胞性質(zhì)的描述，下面哪一種說法不正確?( ) (功具有可誘導(dǎo)性 (b)具有可轉(zhuǎn)移性 (c)細(xì)菌生長的任何時期都可以出現(xiàn) (d)不同細(xì)菌出現(xiàn)感受態(tài)的比例是不同的50．下面關(guān)于用T4多核苷酸激酶標(biāo)記539。 (a)既能標(biāo)記DNA，又能標(biāo)記RNA (b)既能標(biāo)記雙鏈DNA又能標(biāo)記單鏈DNA (c)只能標(biāo)記突出的539。OH的存在51．Southem印跡的DNA探針( )雜交。 (a)Southem印跡雜交 (b)Northem印跡雜交 (c)Western印跡 (d)原位菌落雜交53．下列哪一個不是Southern印跡法的步驟?( ) (a)用限制酶消化DNA (a)DNA與載體的連接 (c)用凝膠電泳分離DNA片段 (d)DNA片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上 (e)用一個標(biāo)記的探針與膜雜交54． 報告基因( ) (a)以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列 (b)以其易于分析的啟動子區(qū)代替感興趣基因的啟動子區(qū) (c)能用于檢測啟動子的活性 (d)能用于確定啟動子何時何處有活性55． 在利用lacZ失活的顯色反應(yīng)篩選法中，IPTG的作用是( ) (a)誘導(dǎo)宿主的α肽的合成 (b)誘導(dǎo)宿主的ω肽的合成 (c)作為酶的作用底物 (d)作為顯色反應(yīng)的指示劑56. 切口移位是指在( )作用下，使( )帶上放射性標(biāo)記。末端標(biāo)記，可用( ) (a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶答案1．c；2．c； 3．b； 4．b 5．b，C，d，e； 6．c； 7．b； 8．d；9．d； 10．B； 11．d； 12．a(chǎn)； 13．d； 14．b 15．d； 16．c；17．a(chǎn)，b；18．a(chǎn)；19．c；20．d；21．c；22．C； 23．b； 24．C；25．d；26．a(chǎn)，C，d；27．b；28．c； 29．b；30．a(chǎn)；31．c； 32．a(chǎn),c,d,e， 33．a(chǎn)，b，c；34．b； 35．c；36．c； 37．d； 38．b；39．c；40．a(chǎn)；41．c； 42．a(chǎn)，b，c； 43．b； 44．b； 45．d； 46．a(chǎn)；47．a(chǎn)； 48．c； 49．c；50．b；51．c； 52．c； 53．b； 54．a(chǎn),c,d；55．a(chǎn)； 56．b；57．a(chǎn)，b； 58．c；59．a(chǎn)；60．d；61．b； 62．c；三、簡答題1．說明Sanger DNA測序法的原理。CGAACATATGGAGT339。 11． 什么叫穿梭載體？ 12． 如何將野生型的l噬菌體改造成為一個理想的載體?13． PCR的基本原理是什么?用PCR擴增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣的信息?14． cDNA克隆與基因組克隆有何不同?15． 怎樣將一個平末端DNA片段插入到EcoR I限制位點中去?16． 簡述以黏粒為載體構(gòu)建基因文庫的原理。請設(shè)計 一個方案用PCR從染色體DNA擴增突變的ThyA基因，測定突變的序列。根據(jù)方案，下面一步驟 是用NaOH溶液浸泡凝膠，使DNA變性為單鏈。然后用標(biāo)記探針雜交，最后發(fā)現(xiàn)放射自 顯影片是空白。25．什么是Western印跡?它與Southern印跡有什么不同?26．用一限制性內(nèi)切核酸酶切割Lac+ Tet+的質(zhì)粒載體，已知該酶識別的是4個堿基序列， 并產(chǎn)生有兩個堿基突出的單鏈末端，該酶在lac基因內(nèi)有切割位點，并在第二個氨基 酸密碼子內(nèi)，該位點可以被任何氨基酸所取代而不影響酶活性。27．在基因工程中，為了在細(xì)菌細(xì)胞中表達(dá)真核生物的基因產(chǎn)物，為什么通常要用cDNA 而不用基因組DNA?為什么要在cDNA前加上細(xì)菌的啟動子?答案 1． 答： Sanger DNA測序法是建立在兩個基本原理之上：(1)核酸是依賴于模板在聚合酶的 作用下由539。端聚合(DNA聚合酶參與了細(xì)菌修復(fù)DNA合成過程)；(2)可延 伸的引物必須能提供游離的339。羥基末 端，因此會終止聚合反應(yīng)的進行。通過比較所有DNA片段的長度可以得知核苷酸的 序列。 3． 答： 回文序列是：539。5．答： 注意星活性，先低鹽，后高鹽；先低溫酶，后高溫酶；并且可以直接在換酶前將第一 種酶失活，再加第二種酶，否則，易產(chǎn)生星活性。 6． 答： 由于反轉(zhuǎn)錄酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的339。外切核酸酶活性，所以聚合反應(yīng)往往會出錯，在高濃度的dNTP和Mg2+下，每500個堿基中可能有一個錯配。539。339。8． 答： S1核酸酶作圖是一種對RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的末端和剪接位點進行作圖的方法。YAC能夠容納長達(dá)幾百kb的外源DNA，這是質(zhì)粒和黏粒辦不到的。10．答： (1)獨立復(fù)制； (2)有選擇標(biāo)記； (3)有獨特的酶切位點； (4)能轉(zhuǎn)化但不擴散。12. 答： (1)削減分子量(除去非必需區(qū)和整合區(qū))； (2)削減酶切位點； (3)添加選擇標(biāo)記； (4)引入終止突變13．答： (1)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外進行DNA的變性、復(fù)性和引物延伸。14．答： 基因組克隆包含所有不在cDNA中出現(xiàn)的內(nèi)含子。這種片段就可以插入到任何EcoRI的限制性內(nèi)切酶位點中。17．答： (1)著絲粒； (2)端粒； (3)ARS序列。19．答： PCR用雙引物，體內(nèi)復(fù)制用單引物。21．答： 為了擴增突變體的thyA基因，先設(shè)計一對引物，其中一個引物的序列與thyA基因的5’端相同，另一個引物同該基因的3’端互補。將染色體DNA同引物混合后，進行PCR擴增。22．答： 如果你的雜交探針是雙鏈的，可能因為在加人雜交混合物之前忘記將探針變性而得到空白的放射自顯影結(jié)果。3’外切核酸酶進行切割； (3)DNA聚合酶Ⅲ的5’174。24．答： 原因是：HindⅢ的切點在A基因內(nèi)。它與Southern的不同在于探針的性質(zhì)不同，在Western印跡中使用的探針是抗體(蛋白質(zhì))。27．答： 這是因為細(xì)菌沒有內(nèi)含子剪接系統(tǒng)，并且不能識別真核生物的啟動子之故。2． 什么是限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性? 受哪些因素影向?3． 影響DNA連接酶催化連接反應(yīng)的因素有哪些?4． 什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?5．細(xì)菌堿性磷酸酯酶和小牛腸堿性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途?6．λ外切核酸酶(1ambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么應(yīng)用?7．Mn2+、Mg2+對Dnase I(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影響?Dnase I在基因工程中有什么作用?8．質(zhì)粒如何維持在細(xì)胞中的穩(wěn)定？9．由于基因