【正文】 指位于基因５ 39。在有關(guān)的文獻(xiàn)中，啟動(dòng)區(qū)的定義似乎不那么嚴(yán)格，有時(shí)人們也把５ 39。從廣義的角度講，控 制基因轉(zhuǎn)錄的各種信號(hào)的任何組合都可以稱之為啟動(dòng)區(qū)。 真核基因啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)： a. －２５元件，亦叫ＴＡＴＡ盒； b. 上游激活元件：ＧＣ box 和ＣＡＡＴ box。末端，也是轉(zhuǎn)錄單位３＇ 末端轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)之后的一段ＤＮＡ序列，其功能是為ＲＮＡ聚合酶提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。它具有使ＲＮＡ轉(zhuǎn)錄反應(yīng)終止的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的功能。 12. 原核基因 組 的結(jié)構(gòu) （ 1）大腸桿菌基因組的組成： 染色體基因組；質(zhì)粒基因組；噬菌體基因組。 b. 與正義鏈互補(bǔ)的ＤＮＡ鏈，叫做反義鏈，也叫無(wú)義鏈或非編碼鏈，簡(jiǎn)稱（－）鏈。 b. 雙鏈ＤＮＡ分子中模板鏈的互補(bǔ) 鏈，叫做編碼鏈，又叫正義鏈，簡(jiǎn)稱（＋）鏈。 Ｅ .coli 基因的編碼序列，并非都是位于基因組ＤＮＡ中某一條固定的單鏈上。 而是在雙鏈ＤＮＡ（基因組）的任何一條單鏈中，都同時(shí)存在著正義鏈和反義鏈 。 *3. 多基因聚集排列的操縱子結(jié)構(gòu)形式 大腸桿菌基因組結(jié)構(gòu)的另一個(gè)特點(diǎn)是，若干功能相關(guān)的基因往往聚集在一起形成獨(dú)立的操縱子結(jié)構(gòu)。大的操縱子有11 個(gè)結(jié)構(gòu)基因。 *4. 染色體基因組的拷貝數(shù) 大腸桿菌染色體基因組的拷貝數(shù)，也就是說(shuō)究竟一個(gè)細(xì)胞同時(shí)能擁有幾條染色體。 b. 在碳源供應(yīng)不足的培養(yǎng)基中，平均每個(gè)細(xì)胞只擁有 條染色體 13. 原核基因的結(jié)構(gòu)： *1. 原核基因ＤＮＡ序列的結(jié)構(gòu)： a. 啟動(dòng)區(qū)序列； b. 轉(zhuǎn)錄 序列區(qū)： (５’ ＵＴＲ；ｃＤＮＡ序列區(qū)－編碼區(qū)；３’ ＵＴＲ )； c. :終止序列區(qū) *2. 原核基因ｍＲＮＡ的結(jié)構(gòu) : （ a）啟動(dòng)區(qū) （ b）轉(zhuǎn)錄序列區(qū)：① 5’ UTR ② 編碼區(qū)，包括起始密碼子和終止密碼子；③ 3’ UTR （ c）終止區(qū) 14. 真核基因的特點(diǎn) ： （ 1）與原核基因不同，真核基因往往含有內(nèi)含子（ intron），它是被包圍在編碼區(qū)之中的非編碼序列； （ 2）真核基因是單順?lè)醋?，編碼單基因產(chǎn)物，而原核基因則往往組成大的轉(zhuǎn)錄單位多順?lè)?子，即單一的 mRNA 分子可編碼多種基因產(chǎn)物； （ 3） 成熟的蛋白質(zhì)基因的 mRNA 分子的 5’ 端有一個(gè)帽的結(jié)構(gòu)， 3’ 端有一個(gè) Poly（ A）尾巴。 *； 大多數(shù)真核生物都是二倍體，具有兩套分別來(lái)自雙親的完整的基因組。 *； 重復(fù)序列的類型：低度～，中 度～，高度～ 重復(fù)序列的排列方式：① 串聯(lián)重復(fù)排列 ② 分散重復(fù)排列 *4. 高比例的非編碼的 DNA 序列； 在真核生物基因組 DNA 中含有大量的非編碼的 DNA 序列，包括 基因與基因之間的非編碼的 DNA 序列 ，以及 基因內(nèi)部的非編碼的 DNA 序列 。 *5. 龐大的基因數(shù)量； 擬南芥 25， 000 種左右，水稻 40， 000 種左右，人類 24， 000 個(gè)左右 。 17. 斷裂基因： 在轉(zhuǎn)錄區(qū)的核苷酸序列區(qū)中，插入有與氨基酸編碼無(wú)關(guān)的 DNA 間隔序列區(qū)，使一個(gè)基因的編碼序列分隔成若干個(gè)不連續(xù)區(qū)段的基因，叫做斷裂基因，包括內(nèi)含子（ intron） 和外顯子（ exon）。 a. 5’ 帽的結(jié)構(gòu) b. 5’ UTR 序列 c. 編碼序列 d. 3’ UTR 序列 e. 3’ 端 poly（ A）尾巴 19. 增強(qiáng)子（ enhancer） 又叫做增強(qiáng)子元件或增強(qiáng)子序列，是真核基因中發(fā)現(xiàn)的一種特異序列，能夠在距離目標(biāo)基因50kb 以上的位置，從上游或 下游的不同位置及方向增強(qiáng)該基因的轉(zhuǎn)錄活性。 增強(qiáng)子的功能作用： ① 成環(huán)作用； 增強(qiáng)子可影響模板附近的 DNA 超螺旋的密度（結(jié)構(gòu)），諸如導(dǎo)致 DNA 超螺旋彎曲，或是在反式作用因子參與下，以蛋白質(zhì)之間的相互作用為媒介，使增強(qiáng)子和啟動(dòng)子之間的 DNA“成環(huán)”的連接模式起始轉(zhuǎn)錄。 ③ 引導(dǎo)作用 可以為反式因子或 RNA 聚合酶 II 提供進(jìn)入染色體結(jié)構(gòu)的“進(jìn)入位點(diǎn)”。 報(bào)告基因： 特指其編碼產(chǎn)物能被快速檢測(cè)，常用來(lái)判斷外源基因是否已經(jīng)成功地導(dǎo)入寄主細(xì)胞、器官或組織的一類特殊基因。 (2)20 世紀(jì) 50 年代的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型與半保留復(fù)制機(jī)理 (3)20 世紀(jì) 50 末 60 初，科技工作者提出中心法則和操縱子學(xué)說(shuō)，遺傳密碼的破譯，闡明了信息流的方向。 23. 酶的分類 : 氧化還原酶類，轉(zhuǎn)移酶類，水解酶類，異構(gòu)酶類，裂解酶類，連接酶類。 25. 切口（ Nick）： 在雙鏈 DNA 的某一條鏈上兩個(gè)相鄰核苷酸之間失去一個(gè)磷酸二酯鍵所出現(xiàn)的單鏈斷裂。 DNA 連接酶無(wú)法封閉裂口 。 27.Ⅱ 型核酸內(nèi)切限制酶的特點(diǎn) （ 1）與 Ⅰ 型、 Ⅱ 型不同，不具備多亞基的結(jié)構(gòu)，可在沒(méi)有修飾的情況下切割； （ 2）識(shí)別雙鏈 DNA 分子的限 制位點(diǎn)； （ 3）切割位點(diǎn)發(fā)生兩條鏈切割，形成互補(bǔ)黏性末端； （ 4）酶切反應(yīng)不需要能量； （ 5）因兩個(gè)單鏈切割部位是交錯(cuò)的，黏性末端互補(bǔ)。 （ 2）酶切消化反 應(yīng)的溫度，大多最適溫度為 37℃ 。這種發(fā)生了改變的限制酶活性，叫做星號(hào)（ *）活性，或限制酶星號(hào)活性。 30. DNA 分子體外連接條件 （ 1）一條 DNA 鏈 3’端存在游離的 3’OH （ 2）一條 DNA 鏈 5’端存在游離的 5’磷酸基團(tuán) （ 3）連接體系需要能量 ATP 31. 堿性磷酸酶的類型： a 細(xì)菌堿性磷酸酶（ BAP） b 小牛腸堿性磷酸酶（ CIP） 32. 平末端 DNA 片段連接的方法 （ 1） T4 DNA 連接酶連接法 （ 2）同聚物 加尾 法 （ 3）限制片段末端修飾法 （ 4）銜接物連接法 （ 5） DNA 接頭連接法 33. T 載體結(jié)構(gòu)上有哪些優(yōu)點(diǎn)？ （ 1） T 載體是一種線性雙鏈 DNA，不需切割，即可擴(kuò)增 PCR 產(chǎn)物； （ 2） 3’–T 單核苷酸延伸末端，可 直接 與 PCR 產(chǎn)物具有 3’ –A 單核苷酸延伸的分子進(jìn)行 堿基 互補(bǔ)； （ 3）線性載體已經(jīng)脫去 5’ –P， 自己 不會(huì)再環(huán)化； （ 4） T 載體中設(shè)計(jì)了 Lac Z 基因，可通過(guò)顯色反應(yīng) X–gal 顯色反應(yīng)分離重組體 ； （ 5）在 T 載體的 3’末端附近還設(shè)計(jì)了多個(gè)核苷酸酶切位點(diǎn) ，便于進(jìn)行多種亞克隆 ； （ 6） T 載體含有 T7， SP6 兩種啟動(dòng)子，便于測(cè)序。 35. λ 噬菌體基因組結(jié)構(gòu) （ 1）左側(cè)區(qū)，自基因 A 到基因 J，包括參與噬菌體頭部蛋白質(zhì)和尾部蛋白質(zhì)合成所需要的全部基因； （ 2）中央?yún)^(qū)，介于基因 J 與基因 N 之間，非必要區(qū)，編碼的基因與保持噬菌斑形成能力無(wú)關(guān)，但 包含了一些與重組有關(guān)的基因，以及使噬菌體整合到大腸桿菌染色體中去 的 int 基因，和把原噬 菌體從寄主染色體上刪除下來(lái)的 xis 基因； （ 3）右側(cè) 區(qū)，位于 N 基因的右側(cè)，包括全部主要的調(diào)控基因，復(fù)制基因，溶菌基因。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： （ 1）其兩側(cè)是由兩個(gè)單鏈 DNA 噬菌體 f1 的復(fù)制信號(hào)，即 f1 起始子和 f1 終止子包圍著； （ 2）含有一個(gè)可以在體內(nèi)發(fā)生刪除作用的 pBluescript 噬菌粒