【正文】 test name﹥輸入實(shí)驗(yàn)名稱，利用﹤”或“﹥”鍵選擇所需參數(shù)。確定所虛波長(zhǎng)后，按EXIT鍵返回此界面，再利用﹤”或“﹥”鍵進(jìn)入如下界面：define test ﹤shanking﹥此指令用于選擇振搖時(shí)間、方式和位置。本室一般把標(biāo)準(zhǔn)品定義在反應(yīng)板的第一列。確定需求后，按EXIT鍵返回此界面，再利用﹤”或“﹥”鍵進(jìn)入如下界面：define test ﹤validations﹥校驗(yàn)公式，此指令用于檢查結(jié)果是否正確。操作人員 部門主管 質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名 ****** ****** ******日期 **年**月**日Ⅳ HBsAg 檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱 項(xiàng)目 編號(hào)制定日期****** ELISA方法****** **年**月**日【目的】保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠.【該SOP變動(dòng)程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。也可使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)?！静僮鞒绦颉?1．實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1:20稀釋。 3．加酶結(jié)合物：，空白對(duì)照孔不加，充分混勻，置37℃孵育30分鐘。2)洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。6．終止反應(yīng)：，混勻。【結(jié)果判斷】 Cutoff值計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均OD值 標(biāo)本OD值COV為陽性，標(biāo)本OD值COV為陰性 注：。 2．從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)貯藏備用。 4．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。 6．封片不能重復(fù)使用。操作人員 部門主管 質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名 ****** ****** ****** 日期 **年**月**日Ⅴ 免疫學(xué)檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期******ELISA方法********年**月**日【目的】保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠, 充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。【方法】【分析前質(zhì)控】1. 人員培訓(xùn) 實(shí)驗(yàn)是人操作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識(shí)：[1] 檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理 （ELISA原理）；[2] 臨床意義；[3] 熟悉檢測(cè)技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；[4] 熟悉檢測(cè)試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；[5] 熟悉檢測(cè)儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識(shí)。2. 室內(nèi)質(zhì)控血清的制備：[1] 收集陽性血清(無明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清,到一定量（夠本室使用36個(gè)月的量）；[2] 傳染性病毒陽性需經(jīng)56℃、10小時(shí)滅活后使用；[3] 過濾，除纖維沉淀物；[4] 稀釋，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋；[5] 測(cè)定值，與定值參考品進(jìn)行對(duì)比、求值，一般定在Cut Off值附近的陽性值；[6] 分裝小瓶（每日用量），加蓋、貼簽，20℃凍存?zhèn)溆谩驹噭┖羞x擇】衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品。，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計(jì)劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；，如原料來源（基因工程或合成多肽），片段的組合（按比例混合或化學(xué)合成），片段的長(zhǎng)短等判斷試劑的優(yōu)劣；，了解不同試劑的質(zhì)控成績(jī)?！緝x器質(zhì)控】為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱），洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。10%以內(nèi)；：經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測(cè)溫度是否一致，允許有177。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測(cè)范圍、線性等等。1%，%。~，甚至更高。應(yīng)注意可測(cè)范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測(cè)范圍，~，~，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意。）于可見光區(qū)對(duì)每個(gè)濾光片進(jìn)行掃描，其檢測(cè)值與標(biāo)定值之差為濾光片波長(zhǎng)精度。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液（校正波長(zhǎng)為630nm）。孔間差的測(cè)量是選擇同一廠家，同一批號(hào)酶標(biāo)2板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（）先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測(cè)，其誤差大小用177。：每個(gè)通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同濃度的甲基橙溶解，蒸餾水調(diào)零，于490nm作雙份平行測(cè)定，每日測(cè)二次（上下午各一次），連續(xù)測(cè)定20天。：用電子天平精確稱取甲基橙配制5個(gè)系列的溶液，于490nm平行測(cè)8次，取其均值。：取一分甲基橙溶液，分別加入3種不同濃度的溶血液（測(cè)定波長(zhǎng)為490nm，校正波長(zhǎng)為585nm），先后于8個(gè)通道檢測(cè)，每個(gè)通道測(cè)3次，比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以考察雙波長(zhǎng)消除干擾組分的效果。，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4℃冰箱5天內(nèi)完成測(cè)試?？缮舷骂嵉够旌?，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。5. ELISA的靈敏度1ng/ml水平上,標(biāo)本間的污染要盡量避免，尤其不應(yīng)與生化試驗(yàn)用同一管標(biāo)本。因此,應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)。[2] 每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到一人一吸頭，以免發(fā)生交叉污染。[3] 樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應(yīng)，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30秒鐘，同時(shí)注意防止液體溢出。[4] 如用滴瓶滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去第一滴有氣泡的試劑后加樣。C），經(jīng)過一定的時(shí)間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)[2] ELISA邊緣效應(yīng)是由溫育形成的。水要浸至板條的1/3處。 3. 洗滌[1] 手工洗滌一般采用浸泡方法：1）甩去孔內(nèi)反應(yīng)液； 2）用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即甩去）；3）微孔重新注滿洗液后浸泡23分鐘，間歇搖動(dòng)；4）甩去孔內(nèi)液體，拍板，用紙吸干。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時(shí)應(yīng)再用手工洗2次以上。4. 顯色[1] HRP催化底物的一步呈色反應(yīng)，同樣需要一定的時(shí)間和溫度，[2] 一定要按照說明書規(guī)定的時(shí)間溫度（一般為37176。，以后者最為常見，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果?！痉治龊筚|(zhì)控】【報(bào)告方式】：國(guó)內(nèi)外為便于統(tǒng)一計(jì)算，一律按S/COV方式報(bào)告，S為標(biāo)本A值，COV即Cut Off值（或COV）[1] 夾心法和間接法以S/COV≥1為陽性；競(jìng)爭(zhēng)法與中和法以S/COV﹤1為陽性[2] COV的計(jì)算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有：A） COV=N（），此公式由P/N，常用于夾心法。C） COV=N+C（C為常數(shù)），用于間接法。此公式最客觀，但對(duì)廠家要求很高，陰陽性對(duì)照測(cè)定值要基本恒定。[1] 用已知量的系列標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以絕對(duì)量或單位表示。[2] 現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線，要得到精確的結(jié)果實(shí)屬不易。[2] 如試驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床診斷有決定意義，其樣本應(yīng)保留，至少與病歷保存期一致【定性試驗(yàn)】ELISA定性試驗(yàn)的臨床意義在于是否檢出病原體，與檢出量無關(guān)，因此QC要保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。建議使用臨界值血清界定法：將試劑盒所設(shè)的陰陽性對(duì)照作為內(nèi)對(duì)照指示反應(yīng)；另設(shè)臨界值、高值質(zhì)控血清，正常人血清作為外對(duì)照，與標(biāo)本