【正文】 1．實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1:20稀釋。2)洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干?！窘Y(jié)果判斷】 Cutoff值計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均OD值 標(biāo)本OD值COV為陽(yáng)性，標(biāo)本OD值COV為陰性 注：。 4．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。操作人員 部門(mén)主管 質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名 ****** ****** ****** 日期 **年**月**日Ⅴ 免疫學(xué)檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期******ELISA方法********年**月**日【目的】保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠, 充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。2. 室內(nèi)質(zhì)控血清的制備：[1] 收集陽(yáng)性血清(無(wú)明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清,到一定量（夠本室使用36個(gè)月的量）；[2] 傳染性病毒陽(yáng)性需經(jīng)56℃、10小時(shí)滅活后使用；[3] 過(guò)濾，除纖維沉淀物；[4] 稀釋，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋；[5] 測(cè)定值，與定值參考品進(jìn)行對(duì)比、求值，一般定在Cut Off值附近的陽(yáng)性值；[6] 分裝小瓶（每日用量），加蓋、貼簽，20℃凍存?zhèn)溆谩驹噭┖羞x擇】衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品?！緝x器質(zhì)控】為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱），洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測(cè)范圍、線性等等。~，甚至更高。）于可見(jiàn)光區(qū)對(duì)每個(gè)濾光片進(jìn)行掃描，其檢測(cè)值與標(biāo)定值之差為濾光片波長(zhǎng)精度。孔間差的測(cè)量是選擇同一廠家，同一批號(hào)酶標(biāo)2板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（）先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測(cè)，其誤差大小用177。：用電子天平精確稱取甲基橙配制5個(gè)系列的溶液，于490nm平行測(cè)8次，取其均值。，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)?？缮舷骂嵉够旌停灰诨靹蚱魃蠌?qiáng)烈振蕩。因此,應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)。[3] 樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應(yīng)，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30秒鐘，同時(shí)注意防止液體溢出。C），經(jīng)過(guò)一定的時(shí)間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)[2] ELISA邊緣效應(yīng)是由溫育形成的。 3. 洗滌[1] 手工洗滌一般采用浸泡方法：1）甩去孔內(nèi)反應(yīng)液； 2）用洗滌液過(guò)洗一遍（即注滿孔后即甩去）；3）微孔重新注滿洗液后浸泡23分鐘，間歇搖動(dòng)；4）甩去孔內(nèi)液體，拍板，用紙吸干。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時(shí)應(yīng)再用手工洗2次以上。，以后者最為常見(jiàn)，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。【分析后質(zhì)控】【報(bào)告方式】：國(guó)內(nèi)外為便于統(tǒng)一計(jì)算，一律按S/COV方式報(bào)告，S為標(biāo)本A值，COV即Cut Off值（或COV）[1] 夾心法和間接法以S/COV≥1為陽(yáng)性；競(jìng)爭(zhēng)法與中和法以S/COV﹤1為陽(yáng)性[2] COV的計(jì)算公式以試劑盒說(shuō)明書(shū)的為準(zhǔn)常見(jiàn)的有：A） COV=N（），此公式由P/N，常用于夾心法。此公式最客觀，但對(duì)廠家要求很高，陰陽(yáng)性對(duì)照測(cè)定值要基本恒定。[2] 現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線，要得到精確的結(jié)果實(shí)屬不易。建議使用臨界值血清界定法：將試劑盒所設(shè)的陰陽(yáng)性對(duì)照作為內(nèi)對(duì)照指示反應(yīng)；另設(shè)臨界值、高值質(zhì)控血清，正常人血清作為外對(duì)照，與標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，臨界值S/≥1，高值質(zhì)控血清S/≥10，~。定量試驗(yàn)的質(zhì)控方法可參考生化方式。SI上=（X最小X）/S， SI下=（X最大X）/S，檢查是否出控，SI上、下限≤規(guī)定值，在控；SI上或下限規(guī)定值，失控。這一過(guò)程是通過(guò)一個(gè)反饋環(huán)路進(jìn)行的：；（預(yù)期值）；；；，并說(shuō)明原因。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)行。在GLP概念里QC即指IQC，其定義為：由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本室工作的可靠性，旨在監(jiān)測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高批內(nèi)批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定檢驗(yàn)報(bào)告是否可靠或可否發(fā)出的一項(xiàng)工作?；覅^(qū)的設(shè)置有二種：（1177。產(chǎn)生該現(xiàn)象的分子機(jī)理有分子變構(gòu)說(shuō)和濃度效應(yīng)等推論。如果出現(xiàn)超過(guò)允許誤差范圍的異常結(jié)果，提示該檢驗(yàn)不合格，應(yīng)尋找原因，糾正后，重檢待測(cè)標(biāo)本。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。質(zhì)控制血清分定值和未定值兩種。質(zhì)控血清的制備，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的條件，選用臨床中心提供的質(zhì)控血清，或按以下方法自己制備本室使用的質(zhì)控血清（以乙肝質(zhì)控血清為例）。4. 用10%的小牛血清或正常人血清（PBS緩沖液）將收集的血清稀釋至所需的濃度。不可反復(fù)凍融。2030次測(cè)定結(jié)果刪除177。其缺點(diǎn)為由于各實(shí)驗(yàn)室吃小灶或互相打電話修改結(jié)果而達(dá)不到真正評(píng)價(jià)作用。通過(guò)評(píng)價(jià)，各實(shí)驗(yàn)室了解本室工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)差距，并設(shè)法改進(jìn)，以不斷提高檢驗(yàn)質(zhì)量。這種方法可以解決實(shí)際問(wèn)題，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)，組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常性進(jìn)行。：SI=（實(shí)驗(yàn)室測(cè)定值預(yù)期值X）/預(yù)期值的標(biāo)準(zhǔn)差s，SI越小，表明越靠近靶值，成績(jī)?cè)胶?。操作人員 部門(mén)主管 質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名 ****** ****** ****** 日期 **年**月**日Ⅶ 免疫金標(biāo)記檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期********************年**月**日【目的】保證免疫金標(biāo)技術(shù)檢驗(yàn)準(zhǔn)確性【本SOP適用范圍】免疫金標(biāo)技術(shù)【該SOP變動(dòng)程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。試驗(yàn)單位為三層反應(yīng)盒，第一層為過(guò)濾器(濾紙層)，第二層為反應(yīng)膜(NC膜或MC膜)上點(diǎn)加有特異性抗原或抗體，第三層為吸水墊料，有稱此滲濾裝置為滴金反應(yīng)板。試驗(yàn)單位為一濾膜條，自上而下分有多個(gè)層次。αHCG溶解并帶動(dòng)它向前移動(dòng)，結(jié)合尿中HCG至抗βHCG抗體處形成復(fù)合物，并在抗βHCG抗體固定處顯示膠體金特有紅色，提示試驗(yàn)陽(yáng)性。常采用檸檬酸、抗壞血酸和白磷。[2] 以檸檬酸為還原劑制備8～10 nm直徑的膠體金(Au l0) 125 ml 3 DW煮沸后加入1％ ml，再煮沸5 min， ml％氯化金溶液，100℃水浴15 min，溶液置室溫待用。制備的膠體金其大小和形狀可在電鏡下觀察確定。因此，為了獲得滿意的膠體金，應(yīng)選擇最純凈的各有關(guān)試劑和液體。4. 膠體金和生物大分子的結(jié)合任何蛋白質(zhì)都能結(jié)合到膠體金顆粒表面，膠體金和蛋白質(zhì)結(jié)合后，并不影響蛋白質(zhì)的反應(yīng)性。，(SPA的等電點(diǎn))待與SPA結(jié)合。1 10％ NaCl，l min后震蕩試管，這時(shí)SPA濃度較低的孔中，膠體金由紅色變?yōu)樽仙f(shuō)明SPA的量不足以包被膠體金。純化2—5nm的金探針時(shí)，以125，000g離心45min(4℃)；純化8～15nm直徑金探針時(shí)，以60，000g離心45~60min(4℃)。適用范圍一般為定性試驗(yàn)。金標(biāo)記方法學(xué)的局限性在于不易準(zhǔn)確定量(變異系數(shù)大)、不易自動(dòng)化分析、試劑成本偏高及質(zhì)量控制困難。、重復(fù)性不滿意，試劑盒應(yīng)有低濃度標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試重復(fù)性。膠體金顯色深淺與被測(cè)物濃度有一定相關(guān)性，因此可對(duì)被測(cè)物進(jìn)行定量檢測(cè)。質(zhì)控線對(duì)比法質(zhì)控線色澤為臨床臨界濃度顯