熒光定量pcr的原理及使用-在線瀏覽
2024-08-05 03:39本頁面
【正文】 就比較高。TaqMan探針法是高度特異的定量技術(shù)，其核心是利用酶的由于探針與模板是特異性結(jié)合，所以熒光信號(hào)的強(qiáng)弱就代表了模板的數(shù)量。TaqManPCRPCR探針只與模板特異性地結(jié)合，其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter,等，3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)(Quencher,TAMRA當(dāng)探針完整的時(shí)候，報(bào)告基團(tuán)所發(fā)射的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收，儀器檢測(cè)不到信號(hào)。PCR酶在鏈延伸過程中遇到與模板結(jié)合的探針，其5′→3′外切核酸酶活性就會(huì)將探針切斷，報(bào)告基團(tuán)遠(yuǎn)離淬滅基團(tuán)，其能量不能被吸收，即產(chǎn)生熒光信號(hào)。PCR信號(hào)的強(qiáng)度就代表了模板的拷貝數(shù)。探針的熒光信號(hào)產(chǎn)生機(jī)制根據(jù)其TaqManTaqMan MGBMGBQuencher)，本身不產(chǎn)生熒光，可以大大降低本底信號(hào)的強(qiáng)度。MGBGrooveTm10176。左右。Tm探針可以比普通探針設(shè)計(jì)得更短，既降低了合成成本，也使得探針設(shè)計(jì)的成功率大為提高。DNA實(shí)驗(yàn)證明，TaqMan探針對(duì)于富含的模板可以區(qū)分得更為理想。MGB20~40G、C40％60％，避免單核苷酸序列的重復(fù)。探針與模板結(jié)合的穩(wěn)定程度要大于引物與模板結(jié)合的穩(wěn)定程度，因此探針的值要比引物的值至少高出 分子信標(biāo)技術(shù)分子信標(biāo)技術(shù)（molecularTaqMan5′和8當(dāng)溶液中有特異模板時(shí)，該探針與模板雜交，從而破壞了探針的發(fā)卡結(jié)構(gòu)即消失，于是溶液便產(chǎn)生熒光，熒光的強(qiáng)度與溶液中模板的量成正比，因此可用于定量分析。值的含義是:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)
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