免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-在線瀏覽
2024-08-04 16:50本頁面
【正文】 min，3000 r/min 離心 20 min5. 重復(fù)步驟3～4，2次6. mL 生理鹽水中，20攝氏度保存?zhèn)溆盟摹⒆⒁馐马?xiàng)鹽析時(shí)注意飽和硫酸銨加入血清中的速度和方式，邊加邊緩慢搖動(dòng)，并避免產(chǎn)生氣泡。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告記錄實(shí)驗(yàn)步驟結(jié)果思考題：分離純化IgG時(shí)，為什么硫酸銨的飽和度先調(diào)至50%，然后調(diào)至33%？加入硫酸銨溶液時(shí)，為什么要一滴滴地加？實(shí)驗(yàn)二 瓊脂糖免疫電泳實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饷庖唠娪镜脑砗陀猛?。掌握免疫電泳?shí)驗(yàn)結(jié)果的分析方法，并對粗提的蛋白進(jìn)行檢測。先利用區(qū)帶電泳技術(shù)將不同電荷和分子量的蛋白抗原在瓊脂內(nèi)分離，然后在與電泳方向平行的方向上開槽，加入抗血清。免疫電泳原理見圖。 打孔及開槽，挑去孔內(nèi)的瓊脂，槽內(nèi)瓊脂暫不挑出。于酒精燈上小心烘烤，使瓊脂與玻璃板貼緊。把載玻片放到電泳槽中，倒入巴比妥緩沖液，瓊脂板兩端用濾紙與緩沖液搭橋，接通電源，電壓1012v/cm電泳12h。用刀片在膠體的中央，劃兩道平行線。用大頭針挑去瓊脂。觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察沉淀弧的位置和條數(shù)，并畫出沉淀弧。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)抗原濃度高于20g/L，應(yīng)用緩沖液稀釋后再進(jìn)行電泳和擴(kuò)散。打孔挖槽時(shí)要求外壁整齊，防止瓊脂破裂。每次電泳后應(yīng)倒換正負(fù)電極或?qū)刹劬彌_液混合后再使用實(shí)驗(yàn)三 酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）夾心法測乙肝表面抗原（HBsAg）一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?． 熟悉ELISA的原理、夾心法。二、 實(shí)驗(yàn)原理免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合的一種方法。目前應(yīng)用最多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），它是將可溶性抗原（或抗體）吸附于固相載體上，加入酶標(biāo)抗體（或抗原）與吸附在載體上的抗原（或抗體）結(jié)合，形成酶標(biāo)記復(fù)合物，再加入酶底物時(shí)，即可顯色。常用的酶有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP），相應(yīng)的底物分別是鄰苯二胺（OPD）和對硝基苯磷酸鹽。在本次實(shí)驗(yàn)中，采用多克隆抗HBs包被反應(yīng)板，加入待測標(biāo)本，同時(shí)加入單克隆抗HBsHRP，如待測標(biāo)本中含有HBsAg時(shí)就與包被抗HBs、抗HBsHRP結(jié)合形成復(fù)
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