常用免疫學相關實驗技術及方法-在線瀏覽
2025-03-10 14:56本頁面
【正文】 法： B細胞克隆與小鼠骨髓瘤細胞融合產生的雜交瘤細胞 3. 基因工程抗體 (engineer antibody) 應用抗體庫技術產生 方法：將某種動物所有抗體的可變區(qū)基因克隆到質?；蚴删w中并表達 ， 然后利用不同抗原篩選出攜帶特異抗體的基因克隆 ， 從而獲得特異性抗體 。這種酶標抗體或抗原既保留其免疫原性 ， 又保留酶的活性；中外 ， 使抗原或抗體固定到某種固相載體表面并保持其免疫活性 ， 利用抗原 、 抗體復合物的免疫學反就原理來測定未記標的抗原 (或抗體 )。 加入酶反應的底物后 ， 底物被酶催化變?yōu)橛猩a物 ， 其量與標本中受檢物質的量直接相關 ， 故可根據(jù)反應顏色的深淺來進行定性或定量分析 。 放射免疫分析多數(shù)用 125I來標記抗體 。 在此固相載體中標記的特異性抗體與特定的未標記抗原產生特異性免疫結合 。 未結合的標記抗體則用洗液去除 。 用 125I標記的抗體 ， 其放射性強度可以直接測定 。 而后將熒光標記了的抗體作為一個試劑 ， 在特定的條件下浸染標本 ， 使之與標本中相應的抗原產生結合反應 。 (四 )免疫組織化學技術 (immunolhistochemistry) 檢測組織切片中蛋白分子在細胞中分布的另一種方法 (類似于免疫熒光技術 )為免疫組織化學技術 。 結合后的抗原 、 抗體復合物中含有的酶可將再加入的無色酶底物通過化學反應呈色 ， 最終借助顯微鏡在細胞 、 亞細胞水平檢測各種抗原物質及其分析 。其基本過程是將蛋白質樣品 (如血清或細胞組織碎片 )在凝膠電泳中分離 ， 再通過電轉染將已分離的蛋白南分子轉移到固相膜上 ， 然后在固相膜上用標記 (放射標記或酶標記 )的特異性抗體檢測蛋白質抗原煤 。 (六 )免疫電泳技術 免疫電泳技術是電泳分析與沉淀反應的結合產物 。 1. 免疫電泳 2. 對流免疫電泳 3. 火箭免疫電泳 4. 免疫固定電泳 5. 聚丙烯酰胺凝膠電泳 第三節(jié) 細胞免疫學技術 一 、 白細胞的分離 血液中紅細胞與白細胞比例為 600:1~1000:1， 兩者的比重不同 ， 其沉降速度亦異 ， 通常用兩種方法加以分離 。 為此利用一種密度介于 (分層液 )做密度梯度離心 ， 使一定密度的細胞按相應密度梯度分布 ， 從而將各種血細胞加以分離 。 三 、 淋巴細胞及其亞群的分離 四 、 淋巴細胞亞群的分離 五 、 淋巴細胞的功能分析 (一 )T細胞功能的檢測 1. T細胞轉化試驗 (1)非抗原性刺激物 (2)抗原性刺激物 2. 細胞殺傷試驗 (1)形態(tài)學檢查法 (2)放射性核素法 (二 )B細胞功能的檢測 1. B細胞早期活性指標的測定 2. 溶血空斑形成試驗 3. B細胞增殖能力的試驗 (三 )NK細胞能力的檢測 1. 形態(tài)法 2. 酶釋法 3. 熒光法 4. 放射性 5. 化學發(fā)光法 (四 )吞噬細胞的檢測 1. 中性粒細胞功能的檢測 (1)細胞運動功能檢測 (2)吞噬和殺菌功能的檢測 2. 巨噬細胞功能的檢測 (1)炭粒廓清試驗 (2)吞噬功能的檢測 (3)巨噬細胞溶酶體酶的測定 第二十二章 常用分子生物學相關實驗技術及方法 第一節(jié) 聚合酶鏈反應 一 、 PCR技術原理 PCR是一種選擇性體外擴增 DNA或 RNA片段的方法 ， 其特異性是由兩個人工合成的引物序列決定的 。 一般情況下 ， 這兩段寡核苷酸引物的序列互不相同 ，并分別與模板進行加熱變性 。 嗣后 ， 退火引物可在 DNA聚合酶作用下進行延伸 。 這種熱變性 復性 延伸的過程就是一個 PCR循環(huán) 。 (一 )高溫變
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