蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)ppt課件-在線瀏覽
2025-06-24 13:46本頁(yè)面
【正文】 專一地 裂解 AsnGly 的肽鍵，酸性 條件下裂解 AsnPro肽鍵 肽鏈的部分降解 酶水解法 常用的酶有 : 胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 胃蛋白酶 嗜熱菌蛋白酶等 優(yōu)越性 : 較高專一性 水解產(chǎn)率較高 肽鏈的部分降解 酶解方法 Lys, Arg殘基羧基形成的肽鍵 疏水殘基羧基形成的肽鍵 疏水殘基之間的肽鍵 ? 胰蛋白酶 (trypsin) 只斷裂 Lys、 Arg殘基的羧基參與形成的肽鍵 以馬來(lái)酸酐可以保護(hù) Lys側(cè)鏈的 ?NH2，得到只含Arg羧基端的肽鏈；或者用 1, 2環(huán)已二酮修飾 Arg的胍基，得到只含 Lys羧基端的肽鏈 ? 胰凝乳蛋白酶 (糜蛋白酶 , chymotrypsin) 只斷裂 Phe、 Trp和 Tyr等疏水氨基酸殘基 的羧基端肽鍵。如果斷裂點(diǎn)鄰近的基團(tuán)是堿性的，裂解能力增強(qiáng)；是酸性的，裂解能力將減弱 蛋白酶的水解專一性 蛋白酶的水解專一性 ? 胃蛋白酶 (pepsin) 與胰凝乳蛋白酶類似，要求 斷裂點(diǎn)兩側(cè)的殘基都是疏水性氨基酸 ，如 PhePhe，最適 pH值為 2，胰蛋白酶則為 8~9。該酶作用專一性較差，常用于較短的多肽或大肽段 N末端分析 C末端分析 氨基酸末端分析 N末端分析 二硝基氟苯法 (FDNB或 DNFB法 ) 二甲氨基萘磺酰氯法 (DNS法 ) 苯異硫氰酸酯法 (Edman法 ) 氨基酸末端分析 氨肽酶 (Amino peptidase)法 二硝基氟苯法 (FDNB法 ) 1945年由 Sanger 發(fā)明此法 曾用此方法測(cè) 定了胰島素的 N 末端 氨基酸 N末端分析 ? DNP氨基酸 (黃色 )對(duì)酸水解遠(yuǎn)比肽鍵穩(wěn)定 ? 多肽鏈上的 ?NH酚 OH也能與 DNFB反應(yīng)，但是產(chǎn)物經(jīng)過(guò)有機(jī)溶劑萃取后與游離氨基酸留在水相，易與 ?DNP氨基酸 區(qū)分開 二甲氨基萘磺酰氯法 (DNS法 ) 1956年由 Hartley等 提出 靈敏度較高 (具有熒光性質(zhì)， 比 FDNB法提高 100倍 ) 樣品量小于 1納摩爾 DNS氨基酸穩(wěn)定性較高 此法優(yōu)點(diǎn) 氨基酸 N末端分析 苯 異硫氰酸酯法 (Edman法 ) 氨基酸 N末端分析 ? 反應(yīng)分為偶聯(lián)、環(huán)化斷裂和轉(zhuǎn)化三步 ? Edman測(cè)序一次能連續(xù)測(cè)定 60~70個(gè)殘基的序列 亮氨酸氨肽酶（ Leucine amino peptidase, LAP） 專一性 : A=非極性氨基酸時(shí) 快 A=其它氨基酸時(shí) 慢 A B N端 A=Leu時(shí) 最快 氨基酸 N末端分析 氨基酸 末端分析 多肽 N端封閉 ? 在序列測(cè)定中，經(jīng)常會(huì)碰上 N端殘基的氨基被封閉，不能與 PITC試劑反應(yīng) ? N端封閉的種類很多，如焦谷氨酸酰化 、 乙酰化以及某些環(huán)肽 (如短桿菌肽 S)的 N和 C末端連接成環(huán)等 C末端分析 肼解法 還原法 羧肽酶法 氨基酸末端分析 肼解法 氨基酸 C末端分析 ? 蛋白質(zhì)或多肽與無(wú)水肼加熱發(fā)生肼解，反應(yīng)中除 C端氨基酸以游離形式存在外，其他的氨基酸都轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的氨基酸肼化物 ? 反應(yīng)中生成的氨基酸酰肼可與苯甲醛作用生成不溶于水的二苯基衍生物而沉淀，上清中的游離 C端氨基酸可借助 FDNB或 DNS法以及層析技術(shù)鑒定 ? Gln, ASn ,Cys被破壞不易測(cè)出， C端 Arg轉(zhuǎn)變?yōu)轼B氨酸 還原法 氨基酸 C末端分析 ? 肽鏈 C端氨基酸用硼氫化鋰還原成相應(yīng)的 ?氨基醇。 (2) 此肽未經(jīng)糜蛋白酶處理時(shí)，與 FDNB反應(yīng)不產(chǎn)生 ?DNP氨基酸 。 (4) 此肽與胰蛋白酶反應(yīng)后同樣能生成兩個(gè)肽段， 它們的氨基酸組成分別是 Arg、 Pro和 Phe、 Tyr、 Lys、 Ser、 Ala。 化合物分子中原子沿共價(jià)單鍵旋轉(zhuǎn)而產(chǎn)生的不同空間排列，構(gòu)象的改變不涉及非共價(jià)鍵的形成與破壞。 肽鍵 (CONH ) 中的４個(gè)原子和２個(gè) ?碳原子 ( C?)被約束在一個(gè)剛性平面（即肽鍵平面）上，構(gòu)成一個(gè)肽平面 CN 鍵長(zhǎng)為 C=N 鍵長(zhǎng)為 酰胺鍵中 CN鍵長(zhǎng)為 nm 三、蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu) (1) ?螺旋（ ? helix） Pauling和 Corey于 1965年提出 結(jié)構(gòu)要點(diǎn)： (1) 肽鍵平面為單位 ,以 ?碳原子為轉(zhuǎn)折盤旋形成 右手螺旋 ，螺旋的每圈有 ，螺旋間距離為 ，每個(gè)殘基沿軸旋轉(zhuǎn)100?，上升 (2) 主鏈原子構(gòu)成螺旋的主體 ,側(cè)鏈在其外部，直徑約為 ?螺旋 左、右手螺旋 (3) 每 個(gè)肽鍵的 羰基氧 與遠(yuǎn)在 第四個(gè)氨基酸氨基上的氫 形成氫鍵 (共形成 n4個(gè)氫鍵 )，所有肽鍵都能參與鏈內(nèi)氫鍵的形成， 氫鍵的方向與中心軸大致平行 , 具有偶極距，是穩(wěn)定螺旋的主要作用力 —C—(NH—C—CO)3 N— O H H R (SN) (4) Pro的 N上缺少 H，不能形成氫鍵，經(jīng)常出現(xiàn)在 ?螺旋的端頭，它改變多肽鏈的方向并終止螺旋 (2) ?折疊 (? pleated sheet ) 三、蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 概念 ： 由兩條或者多條幾乎完全伸展的肽鏈平行排列，通過(guò)鏈間的氫鍵交聯(lián)而成的鋸齒狀的折疊構(gòu)象。是蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)至三級(jí)結(jié)構(gòu)層次的一種過(guò)渡態(tài)構(gòu)象層次 在
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