[自然科學(xué)]免疫學(xué)試驗技術(shù)-在線瀏覽
2025-04-09 05:20本頁面
【正文】 免疫分析測定 放射性核素 3H、 14C、 32P、 57Gr、 125I、 131I 免疫分析測定 熒光抗體 ? ： 熒光素在紫外線照射下可發(fā)出肉眼可見的熒光，其與抗體結(jié)合后仍保持其本身的特性。 熒光抗體的標(biāo)記 ? （１）免疫球蛋白（ IgG ）的提?。?硫酸銨鹽析法、 DEAE纖維素提取法。 ? FITC的標(biāo)記如下： ? ① 濃縮后的 IgG、定量、稀釋（ 10~20mg/ml） . ? ② FITC按蛋白量的 1/80－ 1/100加入。 ? ③ IgG稀釋液與 FITC溶液按１０ :1配合， FITC液緩慢地加入到 IgG稀釋液中，防止出泡。 2－ 4℃ 須 6h 20－ 25℃ 須 1－ 2h即可。 ⑤ 應(yīng)用透析法、鹽析、凝膠過濾法除去未結(jié)合的游離熒光素。 ? 染色： ? 滴加熒光抗體，置 37℃ 染色 30～ 60min，用磷酸緩沖鹽水 (PBS)充分洗滌以除去未結(jié)合的熒光抗體，加 1滴，用蓋玻片封固。 ? 設(shè)對照： ? 進行直接熒光染色時，應(yīng)設(shè)以下對照： ? （ 1）用熒光抗體染正常組織切片或觸片應(yīng)無熒光； ? （ 2）將待檢材料先用未標(biāo)記的抗血清處理，再用熒光抗體染色應(yīng)不出現(xiàn)熒光。 ? 鏡檢： ? 抗抗體必須與抗血清是相應(yīng)的 ， 如該抗血清是豬源的 ， 則用兔抗豬熒光抗體 。 肝臟 胸腺 肺臟 法氏囊 腸道 脾臟 食道 ●熒光抗體技術(shù) 酶標(biāo)抗體 ? 酶標(biāo)抗體 是指與底物結(jié)合后能顯色的 酶 與 抗體連接后所制備的結(jié)合物。根據(jù)有色產(chǎn)物的有無及濃度，可對抗原及抗體做定性、定位和定量測定。 ? （１）免疫球蛋白 IgG的提?。? ? （２）酶標(biāo)抗體的標(biāo)記： 辣根過氧化物酶 、堿性磷酸酶、 β 半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶。 標(biāo)記的方法 以雙功能交聯(lián)劑為 “ 橋 ” ，分別與酶和抗體（抗原）連接形成結(jié)合物。 用 過碘酸鈉 活化酶蛋白分子后，再與抗體（抗原）結(jié)合。 NaIO４法標(biāo)記步驟 : (1) 稱取 5mgHRP溶解于 1ml蒸餾水中。 (3) 將上述溶液裝入透析袋中，對 1mM 液透析， 4℃ 過夜。 (5) 加 4mg／ ml NaBH４液，混勻，再置 4℃2 小時。 （ 7）應(yīng)用鹽析、透析法、凝膠過濾法除去未結(jié)合的 HRP。 ? 酶聯(lián)免疫吸附測定 (enzyme linked immunosorbent assay)簡稱 ELISA： 用于可溶性抗原或抗體的定量 ， 是一種既特異又敏感的方法 。 酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA) ? 包被抗原（抗體） 洗滌 ? 底物顯色 洗滌 抗體（抗原） 間接 ELISA： 檢測抗體 已知 Ag 包被 加入待檢 Ab1 AgAb1 加入 Ab2E AgAb1Ab2E 底物，顯色 AgAb1 AgAb1Ab2E 已知 Ag 底物，顯色 ? 夾心法： 先用抗體 (IgG)被覆 ， 加待檢抗原 ，作用洗滌后 ， 加酶標(biāo)記抗體 。 二 抗？ ? 抗抗體： 抗異種動物的抗體，如 兔抗豬 二抗、 兔抗雞 二抗。 放射性核素標(biāo)記技術(shù) 原理： Ag+AbR AgAbR 用液相閃爍儀測 R放出的射線量 特點：敏感性極高，但需高級閃爍儀， 且同位素對人有放射性危害。 使用最廣泛的是： 125I ① 性質(zhì)活潑、易制備標(biāo)記物 ②對被標(biāo)記物的免疫活性影響小 ③測量方法簡便、已推廣 ④半衰期較長、核素豐度高 三、 免疫制備技術(shù) 抗原制備 抗體制備 抗體和細(xì)胞因子 純化
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1