【正文】 ? 原理 ? 利用蛋白質(zhì)之間的特異性結(jié)合 (抗體 抗原，受體 配體）將一種配基與凝膠顆粒結(jié)合 ,捕捉與它相配的物質(zhì)。 ? 卡介苗等分支桿菌細胞壁中的粘肽（ 胞壁酰二肽， MDP）具有很強的佐劑活性，它能活化巨噬細胞，在注射部位形成肉芽腫，吸引吞噬細胞，進一步增強吞噬細胞和淋巴細胞的活性，使其更易于捕獲抗原。有時還需進行 3次以上的免疫。 ? 酶聯(lián)免疫吸附測定 (enzyme linked immunosorbent assay)簡稱 ELISA： 用于可溶性抗原或抗體的定量 ， 是一種既特異又敏感的方法 。根據(jù)有色產(chǎn)物的有無及濃度，可對抗原及抗體做定性、定位和定量測定。 ? FITC的標記如下： ? ① 濃縮后的 IgG、定量、稀釋（ 10~20mg/ml） . ? ② FITC按蛋白量的 1/80－ 1/100加入。 ? 常用的微載體： 致敏紅細胞、聚苯乙烯乳膠、炭粉顆粒 Ag + （紅細胞、乳膠、炭） 載體 載體 Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag 間接凝集反應(yīng) Ag ?將抗原結(jié)合在微載體上進行的凝集試驗叫 “ 正向間接凝集試驗 ” ； 將抗體結(jié)合在微載體上進行的凝集試驗叫 “ 反向間接凝集試驗 ” 。 在 Ag、 Ab在凝膠中擴散的同時加入電場作用，使 Ag、 Ab的擴散速度加快，同時限制了擴散的方向，增加了試驗的敏感性。 ? 鏡檢： ? 在熒光顯微鏡下進行檢查，抗原所在部位呈黃綠色熒光。 (2) 于上液中加入 NaIO４溶液，室溫下避光攪拌 20分鐘。 ? 常用的免疫動物 ? 免疫的基本步驟 ? 兔子（ rabbit）、雞 (chicken)：最常用于自制抗體，抗體量較多。 ? ② 油乳佐劑： 油水不溶，但在乳化劑存在的情況下，高速攪拌可使二者形成乳劑而制成的佐劑。 ? 蛋白質(zhì)的電荷狀態(tài)可以隨著緩沖液 pH的改變而改變，當(dāng) pH7以上時，大多蛋白質(zhì)帶負電荷，而 DEAE纖維素帶正電荷，當(dāng)血清通過 DEAE纖維素柱時，蛋白質(zhì)即借靜電吸附在纖維素柱上。 IgG ， IgM， IgA的等電點分別為 pH 、 、 。 劑型： 油包水型、 水包油型 水相（ Ag） 油相 油相 水相 常用的油性佐劑有： A、白油佐劑 油相： 94%白油、 6%司本 80（去水山梨醇單油酸酯）、 2%硬脂酸鋁，加熱、融化、高壓滅菌。 （ BALB/C,昆明鼠） ? 大鼠（ rat）：可用于自制抗體，免疫過程要麻醉動物。 (4) 加 20μl 碳酸鹽緩沖液，使以上醛化的 RP的 PH升高到 ～ ，然后立即加入 10mg IgG(抗體 )在 1ml ，室溫避光輕輕攪拌 2小時。 ? 間接法 ? 制片：同直接法 ? 染色： 染色時 ， 標本先滴加抗血清 ， 在37℃ 處理 30～ 60min； ? 用 PBS充分洗滌后 ， 再用熒光標記的抗抗體染色 ， 37℃ 30～ 60min， 洗滌 ， 封固 。 ? 檢測系統(tǒng) Ag + Ab AgAb AgAb補體 + 補體 紅細胞 + 溶血素 紅 溶 指示系統(tǒng) （不溶血，陽性） 紅 溶 補體 （溶血，陰性） 4. 標記抗體技術(shù) 標記抗體技術(shù)是在抗體球蛋白分子上，連接某一個特定的、容易檢測的分子或原子 (標記物 )，利用標記抗體能與相應(yīng)抗原結(jié)合的特性，通過標記物的檢測，從而確定抗原的存在部位。 ? 間接凝集試驗 將可溶性抗原或抗體結(jié)合在一種與免疫無關(guān)的惰性微粒表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，微粒即可被動的被凝集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。 熒光抗體的標記 ? （１）免疫球蛋白（ IgG ）的提?。?硫酸銨鹽析法、 DEAE纖維素提取法。 肝臟 胸腺 肺臟 法氏囊 腸道 脾臟 食道 ●熒光抗體技術(shù) 酶標抗體 ? 酶標抗體 是指與底物結(jié)合后能顯色的 酶 與 抗體連接后所制備