[自然科學(xué)]免疫學(xué)試驗技術(shù)-閱讀頁
2025-03-07 05:20本頁面
【正文】 完全抗原制備 人工抗原制備 血清抗體制備 單克隆抗體制備 硫酸銨鹽析 離子交換層析 凝膠過濾層析 免疫親和層析 用 途 類 型 用于免疫動物，檢測抗體 用于免疫動物，檢測抗體 用于檢測抗原 用于檢測抗原 初步提純 進一步純化 進一步純化 高度純化 抗體標記或致敏 免疫酶技術(shù) 熒光抗體技術(shù) 放射免疫測定 間接凝集試驗 技 術(shù) 酶標記抗體 熒光標記抗體 同位素標記抗體 致敏抗體 /抗原的制備 免疫血清的制備 為含有高效價特異性抗體的血清制劑。 ? 小鼠（ mouse）：可用于自制抗體，但抗體量很少。（ Wistar大鼠） ? 羊（ sheep、 goat）：常用于較大批量地 生產(chǎn)抗體（商品）。 ? 一般可分為基礎(chǔ)免疫和強化免疫兩個階段。有時還需進行 3次以上的免疫。但有時需經(jīng)過多次注射。 健康動物 首免 （常規(guī)劑量） 二免 （倍量同種疫苗） 高度免疫 （強毒或滅活疫苗） 弱毒苗 /滅活苗 12周 23周 ? 注意： ? （１）一般遵循 劑量（抗原量）漸增，毒力漸強 的原則 (弗氏佐劑除外） 。 弗氏佐劑免疫的基本步驟 ? 基礎(chǔ)免疫： 首次，抗原用量大，用弗氏完全佐劑（ Complate Freund’ adjuvand ,含礦物油 ,卡介苗等 ). ? 加強免疫： 第 2次以后，抗原量減半，多次，間隔 24周，用弗氏不完全佐劑 (Inplate Freund’ adjuvand , 不含卡介苗 ). 常用的佐劑 ① 不溶性鹽類膠體佐劑： 氫氧化鋁膠、明礬等。 ? 鉀明礬： KA1（ SO4） 2 .12 H20先配成 10%溶液，應(yīng)用時加入 12%量與抗原混合。 ? ② 油乳佐劑： 油水不溶，但在乳化劑存在的情況下，高速攪拌可使二者形成乳劑而制成的佐劑。 水相： 96%Ag液， 4%吐溫 80（聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯），混勻。 ? B、弗氏佐劑 （ Freund,s adjuvant ， FA） ? 弗氏不完全佐劑和完全佐劑 ? 配方： 礦物油（石蠟油） 3份 乳化劑（羊毛脂、吐溫 80等） 1份 磷酸緩沖液（ PBS） 4份 在此混合物中加入卡介苗（ 12mg/ml),即為 弗氏完全佐劑 ? B弗氏完全佐劑（ Freund,s plete adjuvant， FCA） 在 FIA中加入卡介苗 12mg/ml；或滅活的分支桿菌 10mg/ml。 ? 卡介苗等分支桿菌細胞壁中的粘肽（ 胞壁酰二肽， MDP）具有很強的佐劑活性，它能活化巨噬細胞，在注射部位形成肉芽腫，吸引吞噬細胞，進一步增強吞噬細胞和淋巴細胞的活性，使其更易于捕獲抗原。 常用的純化方法有 鹽析法 、 凝膠過濾 、 離子交換層析以及親和層析等方法 。 血清抗體的分離與純化 免疫球蛋白（ IgG)的制備 ? 硫酸銨分段沉淀法 蛋白質(zhì)是親水膠體，在水溶液中形成水 — 蛋白質(zhì)結(jié)合物；當(dāng)加入鹽后，鹽離子干擾蛋白質(zhì)和水分子間氫鍵的形成（ 水 — 鹽結(jié)合比水 — 蛋白質(zhì)結(jié)合更穩(wěn)定 ），從而使之失 “ 水 ”而凝集，由此降低了蛋白質(zhì)的溶解度而被沉淀析出。蛋白質(zhì)分子量越大沉淀所需鹽濃度越低。 因此常用 33％飽和度的硫酸銨提取血清中的 IgG。 但不同蛋白質(zhì)的等電點不同、荷電不同、分子大小不同，與交換劑結(jié)合強度不同，因此可利用不同的洗脫條件將蛋白質(zhì)分開。 在 ， IgG不帶電荷，不能被 DEAE纖維素（帶正電）吸附而被洗脫下來。 被 DEAE纖維素吸附的其它球蛋白，可用逐漸增加洗脫液中鹽離子的濃度或降低 pH的方法將其逐一洗脫。 ? 適合于 IgM類抗體的純化 ? 原理 ? 利用蛋白質(zhì)之間的特異性結(jié)合 (抗體 抗原，受體 配體）將一種配基與凝膠顆粒結(jié)合 ,捕捉與它相配的
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