【正文】 ： 一般先用 弱毒苗 /滅活苗 按預(yù)防劑量 進行 首次免疫 ，經(jīng) 7天／ 2周左右再用 倍量同種疫苗進行二免 ，即完成基礎(chǔ)免疫。 常用的核素有兩大類： γ射線： 131I、 125I、 57Cr和 60Co β射線： 14C、 3H和 32P。 ? 免疫組化法： 應(yīng)用酶標抗體對生物組織中的抗原進行鑒定和定位 ， 稱為免疫組化法 。僅適用于含糖蛋白分子的酶（如 HRP）標記物制備。 ? １、原理： 能與被檢抗原形成酶標記的免疫復(fù)合物，免疫復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時，催化無色的底物，生成可溶性或不溶性的有色產(chǎn)物。 ? 應(yīng)用 主要用于檢測抗原 （定性、定位） 特點：敏感，需熒光 顯微鏡 直接法： 病料（ Ag） 涂片（切片） FAbAg 鏡檢 間接法： 病料（ Ag） 涂片 AgAb1 Ag Ab1Ab2 F 鏡檢 FAb Ab1 Ab2F 直接法 檢測一種抗原就須標記一種特異性的 AbF ，較特異 間接法 標記一種動物的免疫球蛋白 AbF，就能檢測多種抗原，較敏感 ? 直接法 ? 制片： ? 待檢病理組織做成冰凍切片或觸片，細菌材料可做成涂片，在室溫中自然干燥，病毒抗原通常用冷丙酮固定 l5min，細菌抗原則用加熱固定即可。 ? （２）熒光抗體的標記： 標記 Ab常用的熒光素有 異硫氰酸熒光素 （ FITC，為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，最大吸收光波長為 490495nm，最大發(fā)射光波長 520530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光 ）和 四乙基羅丹明 （ RB200，為橘紅色粉末，最大吸收光波長為 570nm，最大發(fā)射光波長為 595－ 600nm，呈橘紅色熒光 ）。 ? 沉淀抗原是細胞的浸出成分，為細微的膠體溶液，單個抗原的體積小而總面積大，出現(xiàn)反應(yīng)需要的抗體量多 ? 沉淀試驗可分為 環(huán)狀 /絮狀沉淀試驗、瓊脂擴散試驗、免疫電泳。通過微載體進行的凝集試驗叫間接凝集試驗，也稱微載體技術(shù)。特異性的 IgG的 Fc片段與 SPA結(jié)合后，其 Fab片段仍保持與特異性抗原結(jié)合的特點而發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而導(dǎo)致葡萄球菌的凝集。 Ag Ab + 補體結(jié)合試驗 補體結(jié)合試驗是 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，可以再結(jié)合補體 ，但這一反應(yīng)不能被肉眼觀察到，可加入紅細胞及其抗體（溶血素），根據(jù)是否溶血來判定反應(yīng)系統(tǒng)是否存在相應(yīng)抗原抗體，如紅細胞不溶解說明存在相應(yīng)的抗原抗體，為陽性反應(yīng)；如溶血則說明不存在相應(yīng)的抗原抗體，為陰性反應(yīng)。 ? ③ IgG稀釋液與 FITC溶液按１０ :1配合， FITC液緩慢地加入到 IgG稀釋液中，防止出泡。 ? 設(shè)對照： ? 進行直接熒光染色時，應(yīng)設(shè)以下對照： ? （ 1）用熒光抗體染正常組織切片或觸片應(yīng)無熒光； ? （ 2）將待檢材料先用未標記的抗血清處理，再用熒光抗體染色應(yīng)不出現(xiàn)熒光。 ? （１）免疫球蛋白 IgG的提?。? ? （２）酶標抗體的標記： 辣根過氧化物酶 、堿性磷酸酶、 β 半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶。 (3) 將上述溶液裝入透析袋中，對 1mM 液透析， 4℃ 過夜。 酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA) ? 包被抗原（抗體） 洗滌 ? 底物顯色 洗滌 抗體（抗原） 間接 ELISA： 檢測抗體 已知 Ag 包被 加入待檢 Ab1 AgAb1 加入 Ab2E AgAb1Ab2E 底物，顯色 AgAb1 AgAb1Ab2E 已知 Ag 底物，顯色 ? 夾心法： 先用抗體 (IgG)被覆 ， 加待檢抗原 ，作用洗滌后 ， 加酶標記抗體 。 ? 小鼠（ mouse）：可用于自制抗體，但抗體量很少。但有時需經(jīng)過多次注射。 ? ② 油乳佐劑： 油水不溶，但在乳化劑存在的情況下，高速攪拌可使二者形成乳劑而制成的佐劑。 常用的純化方法有 鹽析法 、 凝膠過濾 、 離子交換層析以及親和層析等方法 。 但不同蛋白質(zhì)的等電點不同、荷電不同、分子大小不同，與交換劑結(jié)合強度不同，因此可利用不同的洗脫條件將蛋白質(zhì)