[自然科學]免疫學試驗技術(完整版)
【正文】 免疫組化 免疫分析測定 放射性核素 3H、 14C、 32P、 57Gr、 125I、 131I 免疫分析測定 熒光抗體 ? ： 熒光素在紫外線照射下可發(fā)出肉眼可見的熒光，其與抗體結合后仍保持其本身的特性。單價抗體只有一個抗原結合部位，不會產生凝集反應，當加入抗球蛋白抗體后，可以將兩個各連結一個抗原決定簇的單價抗體再連結起來，出現凝集。 二、 免疫血清學技術 凝集試驗 沉淀試驗 補體參與的 試驗 標記抗體技術 中和試驗 直接凝集試驗 間接凝集試驗 SPA協(xié)同凝集試驗 橋梁凝集試驗 絮狀沉淀試驗 瓊脂擴散試驗 免疫電泳 火箭免疫電泳 補體結合試驗 免疫熒光抗體技術 免疫酶技術 同位素標記技術 中和試驗 用 途 定性 定量 定位 種 類 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 一、 免疫血清學技術 ? 種類： 1. 凝集試驗 細菌和紅細胞等顆粒性抗原，當與相應抗體特異結合后，在適量電解質存在的條件下可逐漸凝集，出現肉眼可見的凝集現象稱為凝集反應（直接凝集試驗） 。 ? 可溶性抗原與相應抗體結合所發(fā)生的沉淀反應 (precipitation)。 ? 熒光抗體與相應抗原結合后，（ 1）通過熒光顯微鏡觀察可測知抗原的存在及部位； （ 2）依熒光強弱也可測知抗原量的差異。 一般以低溫標記為最好。 ? 對照： ? 需用正常血清處理作為對照，此對照片應無熒光。如 戊二醛交聯(lián)法 。 (6) 將上述液裝入透析袋中，對 PBS透析，4℃ 過夜。 ? 用途 : 酶標二抗 熒光標記二抗 ? 兔抗豬高免血清的制備 免疫原： 豬血清 豬 IgG 制備程序： 采取 豬血、分離血清 提取IgG 取 豬 IgG接種于 家兔 （一般３次，每次間隔１０天左右，劑量遞增） 最后一次注射后１０左右采血檢測其瓊擴效價，達１：３２－６４以上時，大量采血，分離血清。 ? 馬（ horse）：常用于大批量生產治療用 抗體（商品）。 ? （２）注射途徑一般采用注射，最好采用分點注射，每一注射點 Ag不宜過多。 ? 制苗時，將油相于勻漿機內，在低速攪拌下，緩緩加入水相（水相 =1： 23）后繼續(xù)高速攪拌 2分鐘，制成乳白色的油包水型油乳苗，分裝。 鹽析法原理 蛋白質在不同鹽濃度的溶液中其溶解度不一樣。故應用 TrisHCl作為洗脫液。 (分子篩 ) ? 原理 ? 將樣品混合物通過一定孔徑的凝膠介質 ,由于流經路徑的差異 ,使不同分子質量的組分分離 . ? 大分子物質直接從凝膠顆粒外通過，走得快；小分子物質進入凝膠顆粒的內部再出來，走得慢。在 : 50％硫酸銨 : 所有的免疫球蛋白都可沉淀； 33％硫酸銨 : 大部分 IgG可沉淀出來； 40％硫酸銨 : 沉淀物的得率最高，但含 IgM、 IgA等 β 球蛋白部分增多。用時佐劑與抗原等量混合。 ? 氫氧化鋁膠佐劑： ? 最簡單的制備方法： AlCl3+3NaOH Al(OH)3+3NaCl 5份 Ag液 +1份鋁膠 ，室溫 2— 4天，棄去部分上清液，混勻分裝。 ? ①基礎免疫
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