免疫學檢測與免疫學技術(shù)-在線瀏覽
2024-11-10 15:05本頁面
【正文】 ：測定靶細胞膜受損后從胞漿內(nèi)釋放至介質(zhì)中的乳酸脫氫酶 (LDH)活性。而且方法簡單，結(jié)果穩(wěn)定，重復性好。 PI滲入死亡細胞內(nèi)與 DNA和 RNA結(jié)合，在 488nm波長激發(fā)下產(chǎn)生綠色熒光。 ? *還可利用熒光染料法 ,細胞光掃描法，雙標記細胞毒法測定細胞毒性細胞的殺傷效應(yīng)。 ? (2)中性粒細胞吞噬 、 殺菌功能測定 ? 1)顯微鏡檢法 ? 2)NBT試驗：此項試驗是測定中性粒細胞吞噬 、殺菌功能的一種簡易方法 。 此類活性氧化基團與細胞內(nèi)殺菌作用密切相關(guān) ， 同時又能激發(fā)細胞內(nèi)某些物質(zhì)產(chǎn)生化學發(fā)光 。 用 125IUdR標記的 DBA/2小鼠肥大細胞瘤 P815作為靶細胞 。 四、細胞因子的檢測 ? （ 一 ） 免疫學檢測法 ? 免疫學檢測的基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測 。 某些細胞因子含量甚微的樣品 (如腦脊液 )可用免疫聚合酶鏈反應(yīng)(immunoPCR)進行檢測 。 ? 靶細胞可直接從組織中分離 ,如骨髓細胞的集落形成試驗和胸腺細胞 (脾細胞 )的增殖試驗 ,或用體外培養(yǎng)的依賴細胞因子才能生長的細胞因子依賴株及對細胞因子殺傷敏感的細胞作為靶細胞 。其中測定細胞代謝酶反應(yīng)細胞增殖數(shù)的比色法包括 MTT、 XTT、 MTS和 NAG等方法。 ? ? 常用于檢測抗病毒活性的細胞株有WISH,Hep2/c,L929,A549 和 MDBK 等 。 ? 常用于攻擊細胞的病毒有濾泡性口炎病毒(VSV)、 鼠腦心肌炎病毒 (EMCV)以及 Sindbis virus等病毒 。 ? ? 多種細胞因子具有趨化活性 ， 分別能誘導中性粒細胞 、 單核 /巨噬細胞和淋巴細胞定向遷移 ? 趨化因子誘導細胞移動的方式包括趨化性和化學增活現(xiàn)象 。 ? (三 )分子生物學測定法 ? RNA印跡法、核酸酶保護分析、原位雜交、 PCR和 Real Time PCR等。 ? (四 )單個細胞產(chǎn)生細胞因子測定法 ? 常用的方法有反向溶血空斑試驗(RHPA)和反向 ELISA斑點試驗 ? (1)反向溶血空斑試驗 (RHPA):RHPA是一種體外檢測抗體分泌細胞的試驗 ,亦可用于檢測細胞因子 。 細胞因子受體檢測的基本技術(shù) ? 細胞因子的廣泛生物學活性是通過與各自相應(yīng)的受體結(jié)合而發(fā)揮的。 五、粘附分子的檢測 ? 某些粘附分子除表達于細胞膜表面外 ，還以可溶性形式存在于體液中 。 六、免疫相關(guān)基因分析 ? *包括各種類型的雜交技術(shù) ， 如轉(zhuǎn)印雜交 、 斑點雜交 、 原位雜交等以及 PCR技術(shù)等 。 分為 cDNA探針 、 寡核苷酸探針 、 基因組 DNA探針及 RNA探針等 。 ? (一 )細胞因子基因組 DNA或 mRNA的檢測 ? 1. Northern雜交分析 2. 斑點雜交法 3. 原位雜交法 4. PCR擴增產(chǎn)物雜交分析 是將細胞因子的mRNA經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA， 用特異性細胞因子引物進行 PCR擴增 ， 通過 Southern blot后 ，再用標記探針檢測特異細胞因子 DNA的水平 。 ? (二 )BCR及 TCR克隆性基因重排分析 ? 1． Southern印跡雜交法：僅適用于科研 ，而不適用于臨床診斷 。 而單克隆性基因重排經(jīng) PCR擴增后 ， 產(chǎn)生明顯相同長度的片段 ， 電泳呈現(xiàn)單一緊密折帶狀結(jié)構(gòu) ? *應(yīng)用 PCR 擴增技術(shù)進行基因診斷具有特異 、 敏感 (1/104~1/105克隆性細胞 )、 快速(24h可完成 )等優(yōu)點 。 ? (三 )HLA基因分型技術(shù) ? 1． 序列特異性寡核苷酸探針 PCR(PCRSSOP)或 PCRASO:PCRSSOP是目前應(yīng)用最多的一種簡單 、 快速而又精確的 HLAⅡ 類抗原分型方法 ， 能鑒定所有已知序列的 HLADR、 DQ、DP等位基因 ， 精確地分析 DNA的多態(tài)性 。 ? 3． 單鏈構(gòu)象多態(tài)性 PCR（ PCRSSCP） ：藉此可鑒別編碼 HLAⅡ 類抗原基因的多態(tài)性 。 在異基因骨髓移植的配型中已初步應(yīng)用于臨床 。 不足之處在于 ， 為檢出所有的等位基因必須用多個引物進行擴增 。 ? *PCR指紋圖譜在選擇非親緣關(guān)系的供 、 受體進行骨髓和器官移植配型時 ， 可以節(jié)省大量時間 。 免疫 PCR是用 DNA分子標記特異性抗體 ，利用 PCR可大量擴增 DNA片段的特點 ， 從而將檢測靈
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