生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制-在線瀏覽
2025-03-07 02:16本頁面
【正文】 導(dǎo)原則 》 《 人基因治療申報臨床試驗指導(dǎo)原則 》 《 藥理毒理檢查指導(dǎo)原則 》 《 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理辦法 》 《 藥品注冊管理辦法 》 生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制 生物技術(shù)藥物的特點(diǎn)： 來源：活的生物體（細(xì)菌或細(xì)胞）； 結(jié)構(gòu)：復(fù)雜（包括組成、空間結(jié)構(gòu)）； 生產(chǎn)：涉及生物材料和生物學(xué)過程（發(fā) 酵、細(xì)胞培養(yǎng)，分離純化等）， 有其固有的易變性。 2）基因工程產(chǎn)品的生物學(xué)活性與藥效學(xué)基本相一致。 效價測定一般原則 國際通用方法； 測定結(jié)果須用國際或國家標(biāo)準(zhǔn)品校 正，以國際單位表示。VSV) 2）離體動物器官測定法 采用家兔主動脈條測定重組腦利鈉肽生物活性。7H2O 、 NaHCO3 g、 Glucose 1 000 mL的溶液， 置于玻璃或塑料瓶中，用 1 mol ? 待張力曲線基線穩(wěn)定后，加入 mgmL1 ，曲線升高至最高并穩(wěn)定后，開始按累計濃度給藥法 (曲線穩(wěn)定后對倍增加樣品濃度為： 105～ 102 RU完成上述給藥后，洗脫并穩(wěn)定 1 h，期問每 20 min換 1次臺氏液。計算對照品和各實驗樣品的半效稀釋倍數(shù)， 按下式計算樣品效價：樣品效價 =對照品效價 樣品半效稀釋倍數(shù)／對照品半效稀釋倍數(shù) 生物學(xué)活性測定方法選擇 體內(nèi)測定和體外測定方法 a、體內(nèi)測定：即整體動物測定，能為較大范圍的重組產(chǎn)品的效價提供有用信息，但費(fèi)時、昂貴、難操作及同時存在倫理問題，大多數(shù)情況下傾向于選擇體外測定方法。 生物學(xué)活性測定方法選擇 定量、半定量、定性方法 a、通過研究首先選擇能夠定量評價的方法，最好的選擇是背景較低的反應(yīng)，并且對相關(guān)產(chǎn)品有陡峭的、可重復(fù)的劑量 反應(yīng)曲線；其次考慮半定量方法（如 NGF），最后考慮定性（如 BMP）方法。 細(xì)胞培養(yǎng)法中細(xì)胞染色標(biāo)記方法 3Hthymidine、 BrdU 是反映 DNA合成、增殖細(xì)胞 數(shù)的比例的。 MTT（四氮唑鹽）：其在活細(xì)胞的線粒體中可以 定量地被琥珀酸脫氫酶還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶 物 MTT formazan,二甲基亞砜（ DMSO）和酸化的異丙 醇或酸化的 SDS均能溶解紫色結(jié)晶物， 通過比色法測 定 MTT formazan的量可以反映線粒體電子傳遞系統(tǒng) 機(jī)能，間接表示細(xì)胞的生長狀態(tài)。 Crystal violet：染活細(xì)胞后，在比色計中測定光吸收值（ A）， A值與著染色細(xì)胞數(shù)成正比。 比較已知濃度或活性單位樣品標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品的實驗結(jié)果。 蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)不能常規(guī)測定，而它的改變（如二硫鍵的錯誤配對）可影響蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，從而影響藥效，比活性可以反映此種情況。 比活性是重組蛋白質(zhì)藥物不同于化學(xué)藥的一項重要指標(biāo)，也是進(jìn)行成品分裝的重要定量依據(jù)。 對于成品的生物活性測定標(biāo)準(zhǔn)，要根據(jù)不同方法的特點(diǎn)規(guī)定相當(dāng)標(biāo)示量的范圍，目前，生物活性的測定方法有四類：動物基礎(chǔ)、細(xì)胞基礎(chǔ)、生化（酶）法、特異（免疫、受體）結(jié)合法。 標(biāo)準(zhǔn)品的使用，最大限度地減少實驗室之間和各種影響測定因素地干擾。 按 WHO規(guī)定必須用 HPLC和非還原 SDSPAGE兩種方法測定，其純度都應(yīng)達(dá)到 95%以上，有的甚至要求達(dá)到 99%以上。 方法：非還原 SDSPAGE電泳法、 HPLC法、毛細(xì)管電泳。蛋白質(zhì)樣品在荷質(zhì)比均一。 毛細(xì)管電泳：簡便、快速、靈敏度和分辨率高；價格高、重現(xiàn)性差。 + 分析方式 紫外、熒光、折射 紫外（可見、熒光） 同 HPLC 電化學(xué)、放射性 銀染、放射自顯影 儀器價格 中～高 低 中～高 日常消耗 低 高 低 自動化 中～高 低 中～高 人力操作 低 高 低 制備級 中 中 微量級制備 收集樣品 可以 可以 較困難 用于研究蛋白質(zhì)純度的方法和機(jī)制 方法 分析機(jī)制 反相 HPLC 疏水性 疏水性相互作用 HPLC 疏水性 毛細(xì)管電泳 荷質(zhì)比 離子交換 HPLC 電荷 等電聚焦 電荷 聚丙烯酰胺凝膠電泳 電荷比 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 電荷，分子大小 分子排阻 HPLC 分子大小 質(zhì)譜測量法 分子大小 三、蛋白質(zhì)含量測定 此項目主要用于原液比活性計算和成品規(guī)格的控制。 蛋白質(zhì)常用的定量方法的比較 方法 所需蛋白質(zhì) 破壞 蛋白質(zhì) /蛋白 技術(shù) 方法的變異 的量（ mg/ml） 與否 質(zhì)變化情況 復(fù)雜性 系數(shù)（ %） 雙縮脲 ～ 5 是
高考資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1