蛋白質分子設計ppt課件-在線瀏覽
2025-03-06 10:02本頁面
【正文】 變部位能量最小化和 2022輪整體能量最小化以及分子動力學模型建立突變體的結構模型，結構模型中沒有不合理的鍵長、鍵角和二面角。 ? 方案的實施 ：通過 基因技術 得到突變體，實驗證明突變體在保持天然酶活性的基礎上大幅度提高了酶的熱穩(wěn)定性。 ? 分子設計 ： Matthews等人經過仔細 比較 和 最小化計算 設計引入 3對二硫鍵 ， 6個半胱氨酸除了 Cys97外，其它 5個半胱氨酸由 Ile Ile Thr2 Thr142和 Leu164突變而來。 2022/2/11 16 ? T4溶菌酶和 6種設計的突變體特性 ? 酶 氨基酸的位置 二硫鍵的數目 相對活性 Tm ? 3 9 21 54 97 142 164 (%) (℃ ) ? wtα Ile Ile Thr Cys Cys Thr Leu 0 100 ? pwt Ile Ile Thr Thr Ala Thr Leu 0 100 ? A Cys Ile Thr Thr Cys Thr Leu 1 96 ? B Ile Cys Thr Thr Ala Thr Cys 1 106 ? C Ile Ile Cys Thr Ala Cys Leu 1 0 ? D Cys Cys Thr Thr Cys Thr Cys 2 95 ? E Ile Cys Cys Thr Ala Cys Cys 2 0 ? F Cys Cys Cys Thr Cys Cys Cys 3 0 ? wtα ：野生型 T4溶菌酶； pwt:假野生型酶； A－ F：六種設計的半胱氨酸變體； Tm:熔點溫度 2022/2/11 17 實驗證明 ? 突變體在氧化狀態(tài)下均比天然蛋白質更穩(wěn)定 ； ? 二硫鍵的環(huán)區(qū) 越長越穩(wěn)定； ? 二硫鍵對蛋白質的穩(wěn)定作用具有加合性 ，即 3對二硫鍵的穩(wěn)定效應相當于 3個二硫鍵各自對蛋白質的穩(wěn)定作用的綜合。 ? 此外， Matthews等人還研究了 螺旋偶極的作用 。說明 穩(wěn)定螺旋偶極能夠增強蛋白質的整體穩(wěn)定性。往往需要幾次循環(huán)才能夠達到目的。 ? 2. 找出對所要求的性質有重要影響的位置 。需要認真考慮此種性質受哪些因素的影響，然后逐一對各因素進行分析， 找出重要位點 ，這是 分子設計工作的關鍵 。 盡量在同源結構中此位點已有的氨基酸殘基序列中進行選擇，同時考慮殘基的體積、疏水性等性質的變化所帶來的影響 。 ? 5. 定性或定量計算優(yōu)化 所得到的突變體結構是否具有所要求的性質。 分子設計的 5個步驟 2022/2/11 22 中改 —— 分子剪裁 ? 定義：是指在蛋白質中替換 1個肽段或者1個結構域。因此可以在不同的蛋白質之間成段地替換結構元件，期望能夠轉移相應功能。 ? 抗體分子 由 2條重鏈， 2條輕鏈組成，重鏈有 4個結構域，輕鏈有 2個結構域； 抗原的識別 部分位于由輕、重二鏈處于分子頂部的個 1個結構域，該結構域是一個高度可變區(qū)。 2022/2/11 24 2022/2/11 25 意義 中改 —— 分子剪裁 ? Winter等人將小鼠單抗體分子重鏈的互補決定子用基因操作辦法換到人的抗體分子的相應部位上，使得 小鼠單抗體分子所具備的抗原結合專一性轉移到人的抗體分子上 。小鼠的單抗比人的單抗容易做，而在醫(yī)學上使用的是人的單抗。 2022/2/11 26 大改 —— 從頭設計 ? 定義 ：從頭設計（ de novo）蛋
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