【正文】 、高效率、高靈敏度、樣品量少、應(yīng)用廣泛等優(yōu)點，但儀器昂貴、不易操作、價格高。 ? ?實驗過程： DNA片段 (probe)進行末端標(biāo)記（同位素、生物素或熒光） ?probe與核蛋白孵育 電泳 干膠 曝光 染色質(zhì)免疫共沉淀 （ ChIP） ? 利用抗原抗體的特異性識別反應(yīng)，將與目的蛋白相結(jié)合的 DNA片段沉淀下來。 ? ChIP不僅可以檢測體內(nèi)蛋白與 DNA的動態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關(guān)系。 DNA affinity purification assay （ DAPA） ? 合成擬分析的 DNA片段，在 DNA片段的末端接上biotin作為探針與核蛋白孵育，再與能耦合生物素的瓊脂糖珠子免疫沉淀，最后利用 western blot的方式分析，從而獲得與 DNA探針相互作用的蛋白質(zhì)信息。 標(biāo)記熒光素的樣品在熒光顯微鏡下經(jīng)過不同波長的激發(fā)光激發(fā) ， 可以發(fā)射出不同顏色的熒光 。 ? 關(guān)鍵點：相應(yīng)的抗體； ? 熒光染料； 熒光顯微鏡 激光共聚焦顯微鏡技術(shù) ? 采用激光做光源 ,激光束經(jīng)照明針孔 ,由分光鏡反射至物鏡并聚焦于樣品上 ,對標(biāo)本內(nèi)焦平面上的每一點進行掃描 ,然后 ,激發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡 ,通過探測針孔時先聚焦 ,聚焦后的光被光電倍增管探測收集 ,并將信號輸送到計算機 ,在顯示屏上顯示圖像。 ? FRAP是由沒有漂白的熒光團從周圍進入漂白區(qū)的運動引起的。分子運動包括膜或活細胞內(nèi)用熒光標(biāo)明的分子的擴散、轉(zhuǎn)移或其他類型的運動。 ? 與 FRAP一樣， FLIP被用來測量膜或活細胞內(nèi)分子運動的力度。 目前比較有效的融合劑是高 pH，高 Ca， 和聚乙二醇 PEG。 最后，這兩組光線經(jīng)過透鏡又會聚 成一束，發(fā)生互相疊加或抵消的干 涉現(xiàn)象，從而表現(xiàn)出肉眼明顯可見 的明暗區(qū)別。所以細胞表現(xiàn)出不同的熒光值。 關(guān)鍵點：抗體，相應(yīng)的熒光素標(biāo)記的二抗；流式細胞儀。 流式細胞術(shù)檢測細胞中 DNA合成量 (BrdU法 ) ? JC－ 1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，具有電勢依賴性積聚于線粒體內(nèi)膜的特性。 ? JC－ 1特異地與線粒體內(nèi)膜結(jié)合，只在線粒體膜電位崩解的時候才釋放出來，因此，檢驗結(jié)果可靠，敏感性高。 ? 根據(jù)蛋白質(zhì)的 cDNA序列的測定，推斷出蛋白質(zhì)分子的序列。 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定方法 生物質(zhì)譜檢測制備技術(shù) 2D膠電泳－切膠－脫色 －脫水－還原－烷基化 －洗膠－脫水－泡漲－ 脫水－重泡漲－酶切－ 萃?。稍铮|(zhì)譜分析 主要國際互聯(lián)網(wǎng)上的免費蛋白 數(shù)據(jù)庫檢索程序 ， 網(wǎng)址如下 : Mascot MSFit: Peptident: PeptideSearch: Services/PeptideSearch 數(shù)據(jù)庫檢索網(wǎng)址 7 9 9 . 0 1 3 3 9 . 4 1 8 7 9 . 8 2 4 2 0 . 2 2 9 6 0 . 6 3 5 0 1 . 0M a s s ( m / z )06 . 1 E + 401020304050607080901 0 0% IntensityS p e c 1 [ B P = 1 4 1 2 . 0 , 6 0 5 9 3 ]1 4 1 2 . 0 3 9 41 6 2 0 . 0 0 4 11 5 6 8 . 1 3 5 61 4 1 5 . 0 1 2 51 2 0 1 . 8 1 3 62 2 6 3 . 4 3 3 21 5 5 1 . 1 2 2 01 3 8 8 . 9 3 2 11 7 6 1 . 2 0 0 41 2 5 1 . 8 7 7 01 6 2 3 . 0 2 0 31 2 3 0 . 7 2 9 52 9 5 5 . 0 1 8 69 1 8 . 6 1 3 6 2 2 1 2 . 5 1 6 01 3 9 6 . 9 9 8 3 1 5 7 1 . 1 4 3 41 8 3 9 . 1 9 5 31 1 7 9 . 7 5 0 59 3 1 . 3 8 3 7 2 1 8 6 . 4 7 4 2 2 4 0 2 . 4 9 5 02 0 1 6 . 3 0 7 4 2 7 1 0 . 9 7 4 81 3 4 9 . 1 1 2 1 2 8 7 3 . 7 9 0 03 2 8 8 . 8 5 7 91 5 9 7 . 4 0 3 9 3 0 6 1 . 9 6 5 3 蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測定方法 ? X射線衍射方法 測定蛋白質(zhì)分子的晶體結(jié)構(gòu)。 ? 用于測定蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu) 相對 變化和變化速度的方法有： 熒光滴定技術(shù) ，紫外差吸收， 園二色光譜 ，紅外光譜 ， Raman光譜 ，脲梯度電泳，各種反應(yīng)基團的暴露。 以 lg(Fo/F1)對 lg[Q]作圖，可求得藥物與蛋白分子的結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點數(shù)。 antibodyantigen, receptorligand, DNADNA, DNAprotein, proteinsmall molecular etc. 全自動，高通量，實時檢測，快速分析生物分子之間的相互作用 。 2） 利用 AFM,可使得細胞及生物大分子在生理溶液的條件下成像 。 而相對于晶體學(xué)方法來說 ， AFM分析不需要依靠于晶體樣品 ， 這非常有利于研究天然狀態(tài)下的生物樣品 。 2，樣品室往多功能發(fā)展 。 4，與其它附件，如能譜、掃描等相連接，拓展了儀器的分析功能 . 不足： 1，樣品制備技術(shù)繁瑣 。 3，圖像為二維平面像 。 不足： 1，分辨率較低（ 30－ 60埃） 2，觀察 “ 死 ” 樣品 3，觀察樣品表面 蛋白修飾 ? 泛素化 (ubiquitination) ? 類泛素化 (sumoylation) ? 甲基化 (methylation) ? 乙?；? (acetylation) ? 磷酸化 (phosphorylation) …………… 國家自然科學(xué)基金 國家“ 973” 重大研究計劃 研究的必要性和重要性 蛋白質(zhì)是基因功能的實施者，蛋白質(zhì)的定位、翻譯后修飾及蛋白質(zhì) 蛋白 質(zhì)相互作用決定了蛋白質(zhì)的功能，也為研究細胞生長，分化和凋亡及重大疾 病發(fā)生和發(fā)展提供了基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾對蛋白質(zhì) 發(fā)揮正常功能具有重要作用，經(jīng)過特殊修飾的蛋白質(zhì)通常可定位在特定的位 臵，與特異的蛋白質(zhì)相互作用，行使特殊的功能。因此， 只有系統(tǒng)研究蛋白質(zhì)的定位、翻譯后修飾及 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)動態(tài)相互作用的規(guī)律，才能從真正意義上闡明一個蛋白質(zhì)的 功能，才有可能研究細胞中某一生理活動中相關(guān)功能蛋