【正文】 m波長下進行吸光光度值的測定，計算酶活。 最佳耐受溫度 ：將 酶和 pH 的緩沖溶液、 ABTS、蒸餾水分別在 20℃、 30℃、 40℃、 50℃下進行預(yù)熱 ， 共 4 個處理 ， 每個處理 3個重復(fù)，各處理 1h， 處理完畢 迅速放入冰里，混合然后在 30℃ 測酶活。 pH 對漆酶的影響和漆酶的 pH 穩(wěn)定性 最適 pH： 將酶液分別和 pH 值 、 、 、 、 、 、 、 、 ABTS、蒸餾水分別在 30℃ 預(yù)熱 10min，混合測酶活 ， 共 8 個處理 ， 每個處理 3 個重復(fù)，測量三組酶活數(shù)據(jù)取平均 值做曲線圖 ， 找出木蹄層孔菌漆酶酶活最大時候的最適 pH 值。 除了底物外， 反應(yīng)體系（ 100 mM 酒石酸鈉 300μl、 1mM ABTS ml、 酶液 500 μl、 H2O 685 μl/550μl、 金屬離子和抑制劑 15μl（ 1mM） /150μl（ 10mM））混合在 30176。 15μl（ 1mM）金屬離子和抑制劑加 685μl蒸餾水， 150μl（ 10mM）金屬離子和抑制劑加 550μl蒸餾水， 以酶液事先滅活后的反應(yīng)混合液為對照 ， 測定各金屬離子對漆酶酶活力的影響。 在最適 pH和最適溫度下 ，測定 lac在不同第 7 頁 共 14 頁 濃度 ABTS時的酶活。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析 根據(jù)查證，漆酶酶活的計算公式如下 [16]： 酶的活性單位 u/L=△ A/Min（ 106247。 SV）和 u/L=△ A/Min（ 103247。 SV）。 3ml 反應(yīng)體系中稀釋后的酶液為 ， 100mM 的檸檬酸緩沖液 (pH3)為 300ul， 1mM 的 ABTS 溶液 ，蒸餾水 700ul。以同體積的蒸餾水為對照組。 cm)[17]。 漆酶的第 9 頁 共 14 頁 pH 耐受如 圖 32 所示 。 處理 1h 時， 當 pH 大于 4， 酶活降級較快 。 最適溫度及熱穩(wěn)定性 圖 33 溫度對酶活力的影響 圖 34 酶的熱穩(wěn)定性 如圖 33 所示，在反應(yīng)溫度為 50176。C。 處理 1h 時， 30176。C 次之，而 40176。C 基本喪失 。C 漆酶耐受性最好， 同時發(fā)現(xiàn) 處理 1h 和處理 24h 的漆酶第 10 頁 共 14 頁 酶活相差 很小 。C 還較穩(wěn)定，高于 50176。 金屬離子及抑制劑對漆酶活性的影響 表 31 激活劑和抑制劑 對漆酶活力影響 抑制劑種類 不同濃度抑制劑（ mmol/L）作用下的相對活力（ %） 1 10 EDTA DDT NaN3 圖 3— 5 金屬離子對酶活影響 如圖 3— 5 所示 ， 10mM/L 的 ba2+、 ca2+、 co+、 fe3+、 na+、 k+這六個金屬離子對漆酶酶活的抑制作用都很強，其中 fe3+對漆酶酶活的抑制作用最強， Cu2+、 zn2+、 mn2+、 mg2+對漆酶酶活的抑制作用一般。 激活劑和抑制劑對酶活影響 如表 3— 1所示 ， 10mM/L DDT、 EDTA、 NaN3均對漆酶的酶活性有著抑制作用，其中 NaN3的抑制作用最強。 第 11 頁 共 14 頁 圖 3— 6 漆酶 圖 3— 7 米 — 曼氏方程雙倒數(shù)圖 由圖 3— 6得出，當 ABTS的濃度為 ，漆酶的吸 光度數(shù)值為最高。 根據(jù)圖 3— 7 雙倒數(shù)圖公式，計算得 Km=。 C，溫度過高則會引起漆酶減產(chǎn)，超過 50176。漆酶在溫度為 50176。故測定漆酶酶活最佳溫度為 50176。隨著溫度的升高，漆酶的酶活下降很快，所以持續(xù)的高溫會嚴重影響漆酶的酶活性。當培養(yǎng)體系的 pH 為 的時候，漆酶的酶活最穩(wěn)定。 10 種不同的金屬離子對兩種漆酶的活性影響表明 ： 10mM/L 的 ba2+、 ca2+、 co+、 fe3+、 na+、 k+這六個金屬離子對漆酶酶活的抑制作用都很強， Cu2+、 zn2+、 mn2+、 mg2+對漆酶酶活的抑制作用一般，其中 fe3+對漆酶酶活的抑制作用最強， 這可能是因為它占據(jù)了底物與酶的結(jié)合位點 (酶的活性中心 )，改變了酶的構(gòu)象 ， 從而使酶活性受到了明顯的抑制 .由于這 6 種離 子對漆酶的活性中心均有毒害作用 ，在應(yīng)用漆酶時應(yīng)避免在溶液中加入這 6 種離子 。 ， 而 Mg2+， Cu2+對兩種漆酶均有激活作用 ， 這與 Mg2+是很多氧化還原酶的催化激活劑的特性比較一致 ， 而漆酶也是一種氧化還原酶 。 第 13 頁 共 14 頁 致 謝 本文是在導(dǎo)師尚潔講師悉心指導(dǎo)下完成的。 實驗雖然簡單，但其中數(shù)據(jù)的獲 取耗費了大量的時間，總共跨度達到三個月，在此期間尚潔老師一直給我們指導(dǎo)，幫我們答疑解惑，才使得我們的實驗?zāi)茼樌瓿伞? 在此對尚潔老師的悉心指導(dǎo)表示衷心的感謝！ 第 14 頁 共 14 頁 參考文獻 [1] 程東升 .兩類木蹄層孔菌在酶蛋白水平上的遺傳分化 [J].苗物系統(tǒng) ,2021,19(1):81 一 8 [2] 中國科普博覽 .2021,2（ 12） [3] 方積年 .木蹄層孔菌多 糖的研究現(xiàn)狀 [J].藥學(xué)通報 ,1986,21(12):944 一 950. [4] 黃益麗 .層孔菌屬多糖的生物活性 [J].生命的化學(xué) ,2021,21(5):372 一 373 [5] 陳潔 .木蹄層孔菌多糖的提取工藝及免疫活性研究 [D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué) ,2021 [6] 劉量 ,鄭維發(fā) ,周守標 .木蹄層孔菌乙醇提取物體內(nèi)抗腫瘤活性及其對荷瘤鼠免疫功能的影響 [J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報 ,2021,27(8):497 一 499 [7] 劉量 ,鄭維發(fā) ,周守標 . 木蹄層孔菌乙醇提取物對腫瘤細胞的抑制作用 [J]. 癌變 .畸變 . 突變 ,2021,40(4):244 一 248 [8] 魏紅福 ,王志江 .響應(yīng)面法優(yōu)化木蹄多糖提取工藝研究 [J].化學(xué)工程和裝備 ,2021,9:8 一 11 [9] 王紅 .論白腐真菌產(chǎn)木質(zhì)素降解酶在環(huán)境治理中的應(yīng)用［ J］．現(xiàn)代商務(wù)工業(yè) ,2021(7) : 297298． [10] 周雪 .白腐真菌漆酶的純化及性質(zhì) [J].生物加工過程 ,2021,9(2):5357 [11] 饒慶隆 .金針菇產(chǎn)漆酶發(fā)酵條件研究 [D].南京：南京林業(yè)大學(xué) ,2021 [12] 朱琳 ,木蹄層孔菌 漆酶 的產(chǎn)生、分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究 [D].哈爾濱： 東北林業(yè)大學(xué) ,2021 [13] 朱思明 ,于淑娟 ,楊連生 .真菌漆酶的生產(chǎn)、性質(zhì)和應(yīng)用 .中國食品添加劑 ,2021,1:126 一 131 [15] 黃乾明 ,楊婉身 ,陳華萍 ,等 .粗毛栓菌誘變菌株 SAH12 漆酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究 .菌物學(xué)報 ,2021,26(4):539 一 548 [14] 初華麗 ,梁宗琦 .漆酶的潛在應(yīng)用價值 .山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報 ,2021,23(6):529 一 533 [15] 曹治云 ,鄭騰 ,謝必峰 ,等 .漆酶在生物檢測中的應(yīng)用進展 .傳感器技術(shù) ,2021， 23(8):13 [16] 李慧梅 ,王淑潔 ,宋蕾 ,李向巖 .動力學(xué)法測定酶活性的計算原理及求證 [J].陜西醫(yī)學(xué)檢驗 ,1994,9(2):116117 [17]司靜，崔寶凱，戴玉成 . 栓孔菌屬漆酶高產(chǎn)菌株的初步篩選及其產(chǎn)酶條件的優(yōu)化 . 微生物學(xué)通報 , 2021, 38(3): 405?416 ag an employment tribunal clai Emloyment tribunals sort out disagreements between employers and employees. You may need to make a claim to an employment tribunal if: you don39。t appealed against the disciplinary action your employer has taken against you. However, if you win your case, the tribunal may reduce any pensation awarded to you as a result of your failure to appeal. Remember that in most cases you must make an application to an employment tribunal within three months of the date when the event you are plaining about happened. If your application is received after this time limit, the tribunal will not usually accept i. If you are worried about how the time limits apply to you If you are being represented by a solicitor at the tribunal, they may ask you to sign an agreement where you pay their fee out of your pensation if you win the case. This is known as a damagesbased agreement. In England and Wales, your solicitor can39。re clear about the terms of the agreement. It might be best to get advice from an experienced adviser, for example, at a Citizens Advice Bureau. To find your nearest CAB, including those that give advice by , click on nearest CAB. For more infor