【正文】 豬胰彈性蛋白酶抑制率僅為 %，對(duì)人白細(xì)胞彈性蛋白酶無抑制作用。將其相同量注入豬的皮內(nèi)，同樣抑制胰蛋白酶水解彈性蛋白，使皮內(nèi)周圍的彈性蛋白大量重建。原花青素對(duì) Vc 保護(hù)和再生的同時(shí)，對(duì)維持膠原質(zhì)的彈性和強(qiáng)度也起作用。Deters A 等在探討金縷梅皮原花青素對(duì)培養(yǎng)的人皮膚角質(zhì)細(xì)胞增殖和分化的影響研究中，得 到金縷梅皮原花青素能明顯促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞增殖，且無分化作用，促進(jìn)皮膚角質(zhì)細(xì)胞新陳代謝，延緩皮膚衰老。此外，臨床研究表明原花青素能有效的改變刺激過程。 原花青素具有良好的抗氧化功能，使其一定程度上延緩 D半乳糖所致小鼠衰老，使衰老模型小鼠血清、肝、腦組織中 LPO 水平均有不同程度的下降。腦脂褐質(zhì)水平下降。原花青素也會(huì)降低正常小鼠血中 MDA 和升高血清 SOD 活力，延長(zhǎng)果蠅平均壽 命。因?yàn)樗芑謴?fù)膠原蛋白活力，使皮膚平滑而有彈性。維生素 C 是生化合成膠原蛋白必要的營(yíng)養(yǎng)品。花青素連接在膠原蛋白上，可以阻止那些破壞膠原蛋白的酶的危害。過度交聯(lián)會(huì)使結(jié)締組織窒息和硬化，從而使皮膚起皺紋和過早老化?；ㄇ嗨匾彩蔷植渴┯玫钠つw霜的極好添加劑。此酶在皮膚組織的黑色素細(xì)胞代謝中起催化作用，引 起黑色素分泌的增加。另一方面，在黑色素顆粒的成長(zhǎng)中，即由體內(nèi)的酪氨酸在酪氨酸酶催化下轉(zhuǎn)化為多巴、多巴醌、多巴色素、吲哚、吲哚醌，最終轉(zhuǎn)變?yōu)榫酆象w的色素顆粒，一直是一個(gè)氧化過程，活性氧在其中表現(xiàn)出重要的作用。 日本學(xué)者 Keiji Takagi 和 TohrμMitsunaga 研究從木本植物 karamatsu 皮 ( Larix sp.)， 阿拉伯樹膠 ( Acacia mearnsii) 和 民間白堅(jiān)木 ( Schinopsis lorentzii)中提取的原花青素對(duì)酪氨酸酶有較強(qiáng)的抑制作用，并證明其抑制作用與原花青素A 環(huán) 5， 7二羥基結(jié)構(gòu)和 B 環(huán) 3， 4， 5三羥基結(jié)構(gòu)有關(guān)。其機(jī)理尚不清楚，可能是與原花青素具有金屬絡(luò)合特性有關(guān) 。 收斂和保濕作用 原花青素的收斂作用，可使粗大的毛孔收縮，汗腺膨脹，使松弛的皮膚收斂、繃緊、減少皺紋，從而讓皮膚顯現(xiàn)出細(xì)膩的外觀。因此開發(fā)出含單寧的抑汗劑，調(diào)整型 收斂液。在空氣中易吸濕是因?yàn)樵ㄇ嗨啬芘c多糖（透明質(zhì)酸）、蛋白質(zhì)、脂類（磷脂）、多肽等復(fù)合的特性。日本開發(fā)出含有 4%肉桂單寧的提高皮膚濕度的化妝品，是基于原花青素的分子中含有親水性的酚羥基結(jié)構(gòu)這一特性。人體發(fā)炎時(shí)要釋放出一種名叫組胺的化合物，它可誘發(fā)上述疾病的種種癥狀?；ㄇ嗨厥墙M胺的著名的抑制劑，但它并不阻礙其它的酶。有關(guān)花青素抗過敏和抗炎癥的能力，許多文獻(xiàn)都有記載。還有報(bào)道，花青素改善許多人的關(guān)節(jié)炎癥。 Liu等報(bào)道原花青素對(duì)老化小鼠 (SAM)免疫和造血功能不全有調(diào)節(jié)作用。原花青素對(duì)因甲醇或感染鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的 小鼠免疫功能不全具有動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)作用，能促進(jìn)小鼠體內(nèi) IL2 的產(chǎn)生，減少感染逆轉(zhuǎn)錄病毒的小鼠細(xì)胞所產(chǎn)生 IL6 的數(shù)量，降低食用甲醇小鼠脾細(xì)胞所產(chǎn)生 IL10 的水平，同時(shí)還可增加自然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性。將 T 細(xì)胞預(yù)先用兒茶素、表兒茶素和原花青素二聚體 B 處理，則可以減弱 PMA 引起 NFκB 黏附活性增強(qiáng)和降低 NFκB 激活的 IL2 基因。 8 原花青素單體到十聚體對(duì)植物凝集素（ PHA）刺激外周血單核細(xì)胞（ PBMC）的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白分泌均有不同程度影響。濃度增加（增加 9 倍），也使 IL4 濃度增加。表達(dá)增加 7%～ 19%，六到十聚體能抑制 PHA 誘導(dǎo)的IL4 的轉(zhuǎn)錄，抑制率達(dá) 71%～ 86%。反應(yīng)的蛋白水平及有絲分裂原刺激 IL4 產(chǎn)生的蛋 白水平，結(jié)果，低聚體對(duì)單核細(xì)胞中 IL2 轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有影響，而五聚體、六聚體和七聚體，能有效抑制IL2 基因表達(dá)，抑制率達(dá) 61%～ 73%。結(jié)果，原花青素單體和二聚體對(duì)外周血 TGF223。1水平，且單體和二聚體最佳，分別增加 66%和 68%；而三聚體到十聚體對(duì)外周血 TGF223。1 水平，其抑制率達(dá) 28%～ 42%。 原花青素對(duì)皮膚保護(hù)作用研究展望 清除自由基和抗氧化作用是原花青素生物活性中研究最早和較為深入的一部分。這些作用都間接增強(qiáng)其對(duì)皮膚的保護(hù)作用。而原花青素對(duì)皮膚的保護(hù)作用中缺少對(duì)正常皮膚或損傷皮膚內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用研究，通過這方面的研究能直接表現(xiàn)出原花青素對(duì)正常皮膚和損傷皮膚是否有保護(hù)和恢復(fù)作用。為了改變這種狀況，必須尋找可利用的新資源。法國(guó) Sanofi 公司用葡萄籽原花青素與大豆卵磷脂制成復(fù)合物，用作血管保護(hù)劑和抗炎劑，每年含復(fù)合物250mg。 此外，德國(guó)的 Brekhman 等研制了用于治療酒精中毒的原花青素制劑并獲專利保護(hù)。 花青素不僅幫助恢復(fù)皮膚彈性，而且也幫助關(guān)節(jié)、動(dòng)脈以及其它組織（如心臟）維持正常功能。因此，不管是從長(zhǎng)期和短期效果來看，花青素都是至今發(fā)現(xiàn)的、最好的心臟保護(hù)劑。盡管法國(guó)人通常吃高脂 肪食物遠(yuǎn)多于美國(guó)人，但法國(guó)人死于心臟病的比例比美國(guó)人少很多，法國(guó)人以愛喝酒出名，通常是進(jìn)餐必飲。 糖尿病性視網(wǎng)膜病是糖尿病的征兆，它是眼睛毛細(xì)血管微出血引起的，是成年盲人的常見病因。這一方法顯著減少了眼睛毛細(xì)血管出血，改善了視力。 1998 年，專家們選擇了許多沒有眼病眼傷的人做試驗(yàn)，考察花青素是否可以緩解夜 盲癥。四個(gè)星期后，再檢查他們的耐盲能力， 98%的試驗(yàn)者有了改善?；ㄇ嗨乜梢詮?qiáng)化毛細(xì)血管、動(dòng)脈與靜脈血管，因此，它有消腫化淤的功效。輸送養(yǎng)分與運(yùn)出廢物這是血液循環(huán)系統(tǒng)的功能?；ㄇ嗨乜梢郧宄?xì)胞膜中水溶性和脂溶性的自由基，因此，抑制了釋放某些酶去傷害毛細(xì)血管壁的過程。缺乏維生素 C 會(huì)造成身體虛弱、不易治愈的折傷、結(jié)締組織不堅(jiān)固、血管壁脆弱與多孔，最后能引起毛細(xì)血管破裂和出血。壞血病患者有如下病癥：體質(zhì)虛弱、牙床軟化而出血、掉牙、皮膚生瘡、關(guān) 節(jié)腫痛、皮下出血等。許多人都有早期壞血病的診兆。現(xiàn)在人們懂得了，僅僅補(bǔ)充抗壞血酸，不是糾正維生素 C缺乏癥的答案。大多數(shù)動(dòng)物能自身產(chǎn)生維生素 C，但是，人類一定要依靠食物才能獲得確保健康所需的維生素 C。早在十九世紀(jì)初期，英國(guó)水手就發(fā)現(xiàn)，吃檸檬可防止壞血病。這吸引了許多科學(xué)家和醫(yī)生去尋找維生素 C 的輔助因子。 在食品方面的應(yīng)用 原花青素作為天然強(qiáng)力自由基清除劑倍受青睞，國(guó)外，已廣泛用于延緩衰老、 11 調(diào)節(jié)血壓血脂、抗腫瘤、健腦等保健食品中。 在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用 原花青素的多羥基結(jié)構(gòu)使它具有特殊抗氧活性和清除自由基的能力，已成為科學(xué)家關(guān)注的熱點(diǎn)，也為其在化妝品領(lǐng)域開辟了廣闊前景。低聚原花青可減少皺紋，增加皮膚彈性。 OPC 清除自由基，阻斷硬彈性蛋白酶的產(chǎn)生并抑制其活性，因而根本上改善皮膚的健康狀況。從而避免或減少皺紋的產(chǎn)生。其既可作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，又可作為防腐劑替代合成防腐劑 (如苯甲酸等 )，符合人們回歸自然的要求 .提高了其應(yīng)用的安全性。 3 實(shí)驗(yàn)的目的和意義 鑒于以上文獻(xiàn)綜述，關(guān)于原花青素具有多種生物活性，其中，抗氧化研究已有不少報(bào)道，故本論文以分離得到的蓮房，蓮子殼中活性因子－原花青素（多酚）為試驗(yàn)材料，以 Vc 為對(duì)照做比較，通過還原力測(cè)定、抗氧化值測(cè)定、對(duì)羥基自由基的抑制作用、對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用等一系列的試驗(yàn)，初步探討LSPC 抗氧化作用機(jī)制，并與 Vc 做對(duì)比。也為 12 一些前沿科學(xué)研究提供一些理論基礎(chǔ)。 第一部分 前言、目的和意義 第二部分 微波輔助提取原花青素的工藝 第三部分 蓮房（及蓮子殼）原花青素的抗氧化能力的研究 第四部分 結(jié)論 13 第 二 章 微波輔助提取原花青素的工藝 引言 直接使用試劑浸泡原材料來提取蓮中的原花青素的得率不高，且所需的時(shí)間比較長(zhǎng)，所以在工業(yè)化中用這種方法提 取原花青素的經(jīng)濟(jì)價(jià)值不高。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過微波輔助、超聲波輔助以及改變提取溫度等方法可以提高原花青素的得率。因此為藥理學(xué)、生命科學(xué)研究等方面提供一點(diǎn)理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 蓮房的預(yù)處理：將蓮房篩選除去雜質(zhì)后粉碎過 60 目篩，用正己烷脫脂后待用。配制試劑：稀釋十倍的 Folinclocalteau 原液試劑及15%的碳酸鈉溶液。 提取液中總多酚含量的測(cè)定：移取待測(cè)提取液 于 10mL 容量瓶中，依次假如 Folinclocalteau（稀釋后）顯色劑及 2mL 15%碳酸鈉溶液并定容，反應(yīng) 2h 后測(cè)定（ A760）吸光度值 ,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多酚的沒食子酸當(dāng)量，并計(jì)算提取得率。精確稱取 香草醛 （香蘭素）固體溶解到 50mL 甲醇中，混勻待用。用移液管移取兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液 、 、 、 、 、 ,用去離子水定容到 10mL 得不同濃度的對(duì)比溶液。以 15 香草醛 甲醇、 濃鹽酸、 甲醇的混合液作為空白對(duì)照，在 500nm 處測(cè)吸光度值，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。 溶劑濃度的選擇 精密稱取 7 份 的蓮房粉放入錐形瓶中，加入一定濃度，一定料液比的溶劑，微波功率一定，萃 取時(shí)間一定，考察不同濃度溶劑（ 20%、 30%、 40%、50%、 60%、 70%、 80%、）對(duì)提取效果的影響然后進(jìn)行多酚和原花青素提取綠的影響。 微波萃取功率的影響 精密稱取 5 份 的蓮房 粉放入 100mL 的燒杯中，以選定溶劑為提取劑，一定料液比，微波作用 50s 后，以提取綠為衡量指標(biāo)，考察了微波功率（ 20%、40%、 60%、 80%、 100%）對(duì)總酚和原花青素提取效果的影響。 萃取次數(shù)的 影響 精密稱取 4 份 的蓮房粉放入錐形瓶中，以選定溶劑為提取劑，料液 16 比為一定，微波功率為中火（ 80%功率），微波處理 90s,以提取率為指標(biāo)，考察了提取次數(shù)（ 4 次）對(duì)總酚和原花青素提取效果的影響。 正交實(shí)驗(yàn) 精確稱 取蓮房粉 9 份，每份 1 g，置于三角瓶中，按 L9(34)正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)浸提條件，提取過濾、離心合并濾液，于真空條件下濃縮回收酒精，濃縮樣品，定容，測(cè)定蓮房多酚和原花青素的含量。得回歸方程為 y=ax+b(其中 y 為沒食子酸的含量 mg， x 為吸光度值 ) 單因素實(shí)驗(yàn) 溶劑選擇 01234567870%甲醇70%乙醇70%丙酮1%亞硫酸氫鈉溶劑得率（%)原花青素 總酚 圖 3 溶劑選擇 Fig3 Solvent choice 如（圖 3）所示，在所有實(shí)驗(yàn)中，用丙酮作為萃取劑的組不論是原花青素得 18 率還是總酚得率，其數(shù)值都高于其他溶劑，因此與之相比丙酮是比較理想的萃取劑。 微波作用時(shí)間的影響 0123456780 20 40 60 80 100 120微波作用時(shí)間（s )得率（%)原花青素 總酚 圖 5 微波作用時(shí)間的影響 Fig5 Microwave time of Impact 19 在其它條件相同的情況下，考慮微波作用時(shí)間的不同對(duì)原花青素和總酚得率的影響，如（圖 5）所示，當(dāng)微波作用時(shí)間定為 90s 時(shí)，其得率是最高的。如（圖 6）所示，當(dāng)把微波的輸出功率調(diào)整到 80%（即 560W）時(shí)，原花青素和總酚的得率達(dá)到最高 值。如（圖 7）所示當(dāng)料液比為 1： 25 時(shí)，兩者的得率都在同條件下達(dá)到最高。 pH 值的影響 01234560 1 2 3 4 5 6 7 8pH值得率(%)原花青素 總酚 圖 9 pH 值的影響 Fig9 pH Value of Impact 21 通過調(diào)整溶劑的 pH 值來觀察其對(duì)兩者的得率的影響，如（圖 9）所示 pH值對(duì)總酚的影響不大，而且當(dāng) pH 值調(diào)整為 5 時(shí)，兩者的得率都是最高的。 水提原花青素的單因素實(shí)驗(yàn) 微波作用時(shí)間的影響 23 0123456730 40 50 60 70 80 90 100 110微波作用時(shí)間（s )得率（%)蓮房 蓮子殼 圖 11 微波作用時(shí)間的影響 Fig11 Microwave time of Impact 在對(duì)單因素 時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，如圖 11 所示，微波作用時(shí)間定為 90s 時(shí)原花青素和總酚的得率都達(dá)到其它條件相同下 的最高值。 24 料液比的影響 0123456781:15 1:25 1:25 1:30 1:35 1:40料液比得率（%）蓮房 蓮子殼 圖 13 料液比的影響 Fig13 Feed ratio of Impact 如圖 17 所示，當(dāng)料液比為 1： 25 時(shí)，原花青素的得率達(dá)到最高值。 萃取次數(shù)的影響 0123456780 1 2 3 4 5萃取次數(shù)得率（%)蓮房 蓮子殼