【正文】 Etat des Sciences de BordeauxⅡ [J]. [14] al.,(Perkin I)[J]1972:13871399. [15]朱振勤，翟萬(wàn)銀，陳季武等 . 葡萄籽原花青素提取物抗氧化作用研究 [J]. 華東師范大學(xué)學(xué)報(bào) (自然科學(xué)版 )， 2021， [16] 焦淑萍，陳彪，李佳 . 野生山葡多酚對(duì)小鼠組織的抗氧化作用研究 [J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生，2021a， 19（ 5）： 569570 [17]舒嘯塵，李悠慧，嚴(yán)衛(wèi)星等 . 葡萄籽多酚在擬衰老模型小鼠中抗氧化功能的研究 [J]. 衛(wèi) 40 生研究， 2021， 31（ 3）： 191192,196 [18]焦淑萍，姜虹，陳彪等 . 野生山葡萄皮渣多酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)老齡大鼠腦脂褐素的影響 [J]. 北華大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2021b， 4（ 2）： 127129 [19]張丁，張杰，孟光等 . 低聚原花青素及銀杏黃酮對(duì)小鼠體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化和延緩果蠅衰老實(shí)驗(yàn)研究 [J]. 河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2021， 13（ 5）： 257260 [19]鐘進(jìn)義，栗世如 . 葡多酚與輻照對(duì)小鼠 S180 肉瘤的協(xié)同抑制作用研究 [J]. 癌變 通過(guò)對(duì)是使用丙酮作為溶劑還是亞硫酸氫鈉作為溶劑的比較，得出用亞硫酸氫鈉為佳的結(jié)論，并且使用亞硫酸氫鈉比較經(jīng)濟(jì)，在萃取時(shí)不易帶出其它雜質(zhì)。另一方面由于原花青素可在分子內(nèi)和分子間形成締合氫鍵，成為一個(gè)大的供氫體，從而達(dá)到對(duì)羥基自由基清除的目的。OH的能力亦增強(qiáng) , 呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。 原花青素的還原力在一定的濃度范圍內(nèi)隨著濃度的升高而增強(qiáng)，這表明其抗氧化能力也隨著濃度的升高而增強(qiáng)。 抗氧化值的測(cè)定 表 6 原花青素的抗氧化值 Table6 Procyanidin antioxidant value 樣品 消耗體積（ mL） AOV 值 蓮房 蓮子殼 如（表 1）所示，蓮房和蓮子 殼初提液中的原花青素的抗氧化能力要比維生素 C 略高。 O2－ 清除率（ %） =（ A－ A1） /A100 取提取物 50－ 200μ g 用 3mL 乙醇溶解，與 3mLDPPH.（ 200μ M 用 3mL乙醇溶解） , 200μ M。測(cè)定 原花青素 對(duì) O2 反應(yīng)體系中含 13 mmoL/L 甲硫氨酸(Met)， 10 mmoL/L核黃素 (RF)， 102 mmoL/L氮藍(lán)四唑 (NBT)， 100 mmoL/L EDTA 及 不同 濃度樣品，磷酸鹽緩沖液（ pH ）補(bǔ)至總體積為 mL。取出后于 510nm 處比色測(cè)定 OD 值。從而使有色產(chǎn)物的生成量減少導(dǎo)致吸光度減小。 OH，并產(chǎn)生有色物質(zhì)，該有色產(chǎn)物在 510nm 處有強(qiáng)吸收。 AOV=(V 空 V 樣 ) M 34/ 式中： V 空 ， V 樣 分別為空白和樣品消耗的硫代硫酸鈉的體積（ mL）； M 為硫代硫酸鈉的摩爾濃度； 34 為雙氧水的摩爾濃度 . 對(duì)羥基自由基（? OH）的抑制作用 pH 值和金屬離子對(duì) LSPC 清除羥基自由基作用的影響 按 Smimoff N (1989)的方法改進(jìn) H2O2與二價(jià)鐵離子混合后產(chǎn)生 Masquelier 教授和許多科學(xué)家利用花青素，已經(jīng)做了 20 多年的各種臨床、化驗(yàn)、毒性和藥物動(dòng)力學(xué)的研究。 大量科學(xué)研究證實(shí)：花青素是目前所知的、最高效的、抗氧化的自由基清除劑。 DNA（脫氧核糖核酸）包含了所有產(chǎn) 生細(xì)胞、賦予細(xì)胞職責(zé)、修復(fù)細(xì)胞的 “藍(lán)圖 ”。氧自由基能夠通過(guò)氧化從鄰近分子那里偷走電子，從而破壞酶分子、蛋白質(zhì)分子，或者一個(gè)完整的細(xì)胞。這些都是因氧化張力產(chǎn)生的自由基傷害的例子。一旦我們體內(nèi)的自由基太多而失控，身體就負(fù)擔(dān)過(guò)重而疲勞，這就是 “氧化張力 ”。 30 第 三 章 原花青素的抗氧化能力的研究 前言 我們可能活到 125 歲嗎？科學(xué)家的回答是：能！首先，為了活到這個(gè)生理極限，我們必須動(dòng)手消除那些摧毀我們健康的毒性侵入物。 通過(guò)以上試驗(yàn)可以證明利用微波輔助提取原花青素是可取的，而且經(jīng)過(guò)微波處理后的蓮房和蓮子殼中的原花青素被提取出的含量也是相當(dāng)?shù)母撸ㄅc單純的浸泡相比）。 紫外掃描 為了觀察用丙酮作為萃取劑來(lái)萃取原花青素和總酚在得到原花青素初提液時(shí)是否同時(shí)破壞了原花青素的結(jié)構(gòu)，因此將丙酮 蓮房、丙酮 斂資殼的初提液通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，再用 60%的丙酮溶解，在 196nm— 900nm 范圍內(nèi)做全波長(zhǎng)紫外掃描，并與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比。 24 料液比的影響 0123456781:15 1:25 1:25 1:30 1:35 1:40料液比得率（%）蓮房 蓮子殼 圖 13 料液比的影響 Fig13 Feed ratio of Impact 如圖 17 所示，當(dāng)料液比為 1： 25 時(shí)，原花青素的得率達(dá)到最高值。 pH 值的影響 01234560 1 2 3 4 5 6 7 8pH值得率(%)原花青素 總酚 圖 9 pH 值的影響 Fig9 pH Value of Impact 21 通過(guò)調(diào)整溶劑的 pH 值來(lái)觀察其對(duì)兩者的得率的影響，如（圖 9）所示 pH值對(duì)總酚的影響不大，而且當(dāng) pH 值調(diào)整為 5 時(shí)，兩者的得率都是最高的。如（圖 6）所示，當(dāng)把微波的輸出功率調(diào)整到 80%（即 560W）時(shí)，原花青素和總酚的得率達(dá)到最高 值。得回歸方程為 y=ax+b(其中 y 為沒(méi)食子酸的含量 mg， x 為吸光度值 ) 單因素實(shí)驗(yàn) 溶劑選擇 01234567870%甲醇70%乙醇70%丙酮1%亞硫酸氫鈉溶劑得率（%)原花青素 總酚 圖 3 溶劑選擇 Fig3 Solvent choice 如（圖 3）所示，在所有實(shí)驗(yàn)中，用丙酮作為萃取劑的組不論是原花青素得 18 率還是總酚得率，其數(shù)值都高于其他溶劑，因此與之相比丙酮是比較理想的萃取劑。 萃取次數(shù)的 影響 精密稱(chēng)取 4 份 的蓮房粉放入錐形瓶中，以選定溶劑為提取劑，料液 16 比為一定，微波功率為中火（ 80%功率），微波處理 90s,以提取率為指標(biāo)，考察了提取次數(shù)（ 4 次）對(duì)總酚和原花青素提取效果的影響。 溶劑濃度的選擇 精密稱(chēng)取 7 份 的蓮房粉放入錐形瓶中，加入一定濃度，一定料液比的溶劑，微波功率一定，萃 取時(shí)間一定，考察不同濃度溶劑（ 20%、 30%、 40%、50%、 60%、 70%、 80%、）對(duì)提取效果的影響然后進(jìn)行多酚和原花青素提取綠的影響。用移液管移取兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液 、 、 、 、 、 ,用去離子水定容到 10mL 得不同濃度的對(duì)比溶液。 提取液中總多酚含量的測(cè)定：移取待測(cè)提取液 于 10mL 容量瓶中，依次假如 Folinclocalteau（稀釋后）顯色劑及 2mL 15%碳酸鈉溶液并定容，反應(yīng) 2h 后測(cè)定（ A760）吸光度值 ,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算多酚的沒(méi)食子酸當(dāng)量，并計(jì)算提取得率。 實(shí)驗(yàn)方法 蓮房的預(yù)處理：將蓮房篩選除去雜質(zhì)后粉碎過(guò) 60 目篩，用正己烷脫脂后待用。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)微波輔助、超聲波輔助以及改變提取溫度等方法可以提高原花青素的得率。也為 12 一些前沿科學(xué)研究提供一些理論基礎(chǔ)。其既可作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，又可作為防腐劑替代合成防腐劑 (如苯甲酸等 )，符合人們回歸自然的要求 .提高了其應(yīng)用的安全性。 OPC 清除自由基，阻斷硬彈性蛋白酶的產(chǎn)生并抑制其活性，因而根本上改善皮膚的健康狀況。 在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用 原花青素的多羥基結(jié)構(gòu)使它具有特殊抗氧活性和清除自由基的能力，已成為科學(xué)家關(guān)注的熱點(diǎn)，也為其在化妝品領(lǐng)域開(kāi)辟了廣闊前景。這吸引了許多科學(xué)家和醫(yī)生去尋找維生素 C 的輔助因子。大多數(shù)動(dòng)物能自身產(chǎn)生維生素 C，但是，人類(lèi)一定要依靠食物才能獲得確保健康所需的維生素 C。許多人都有早期壞血病的診兆。缺乏維生素 C 會(huì)造成身體虛弱、不易治愈的折傷、結(jié)締組織不堅(jiān)固、血管壁脆弱與多孔，最后能引起毛細(xì)血管破裂和出血。輸送養(yǎng)分與運(yùn)出廢物這是血液循環(huán)系統(tǒng)的功能。四個(gè)星期后，再檢查他們的耐盲能力， 98%的試驗(yàn)者有了改善。這一方法顯著減少了眼睛毛細(xì)血管出血，改善了視力。盡管法國(guó)人通常吃高脂 肪食物遠(yuǎn)多于美國(guó)人，但法國(guó)人死于心臟病的比例比美國(guó)人少很多，法國(guó)人以愛(ài)喝酒出名，通常是進(jìn)餐必飲。 花青素不僅幫助恢復(fù)皮膚彈性，而且也幫助關(guān)節(jié)、動(dòng)脈以及其它組織（如心臟）維持正常功能。法國(guó) Sanofi 公司用葡萄籽原花青素與大豆卵磷脂制成復(fù)合物，用作血管保護(hù)劑和抗炎劑，每年含復(fù)合物250mg。而原花青素對(duì)皮膚的保護(hù)作用中缺少對(duì)正常皮膚或損傷皮膚內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用研究，通過(guò)這方面的研究能直接表現(xiàn)出原花青素對(duì)正常皮膚和損傷皮膚是否有保護(hù)和恢復(fù)作用。 原花青素對(duì)皮膚保護(hù)作用研究展望 清除自由基和抗氧化作用是原花青素生物活性中研究最早和較為深入的一部分。1水平，且單體和二聚體最佳，分別增加 66%和 68%；而三聚體到十聚體對(duì)外周血 TGF223。反應(yīng)的蛋白水平及有絲分裂原刺激 IL4 產(chǎn)生的蛋 白水平，結(jié)果，低聚體對(duì)單核細(xì)胞中 IL2 轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有影響，而五聚體、六聚體和七聚體，能有效抑制IL2 基因表達(dá)，抑制率達(dá) 61%～ 73%。濃度增加（增加 9 倍），也使 IL4 濃度增加。將 T 細(xì)胞預(yù)先用兒茶素、表兒茶素和原花青素二聚體 B 處理，則可以減弱 PMA 引起 NFκB 黏附活性增強(qiáng)和降低 NFκB 激活的 IL2 基因。 Liu等報(bào)道原花青素對(duì)老化小鼠 (SAM)免疫和造血功能不全有調(diào)節(jié)作用。有關(guān)花青素抗過(guò)敏和抗炎癥的能力，許多文獻(xiàn)都有記載。人體發(fā)炎時(shí)要釋放出一種名叫組胺的化合物，它可誘發(fā)上述疾病的種種癥狀。在空氣中易吸濕是因?yàn)樵ㄇ嗨啬芘c多糖（透明質(zhì)酸）、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)（磷脂）、多肽等復(fù)合的特性。 收斂和保濕作用 原花青素的收斂作用，可使粗大的毛孔收縮，汗腺膨脹，使松弛的皮膚收斂、繃緊、減少皺紋，從而讓皮膚顯現(xiàn)出細(xì)膩的外觀。 日本學(xué)者 Keiji Takagi 和 TohrμMitsunaga 研究從木本植物 karamatsu 皮 ( Larix sp.)， 阿拉伯樹(shù)膠 ( Acacia mearnsii) 和 民間白堅(jiān)木 ( Schinopsis lorentzii)中提取的原花青素對(duì)酪氨酸酶有較強(qiáng)的抑制作用，并證明其抑制作用與原花青素A 環(huán) 5， 7二羥基結(jié)構(gòu)和 B 環(huán) 3， 4， 5三羥基結(jié)構(gòu)有關(guān)。此酶在皮膚組織的黑色素細(xì)胞代謝中起催化作用，引 起黑色素分泌的增加。過(guò)度交聯(lián)會(huì)使結(jié)締組織窒息和硬化，從而使皮膚起皺紋和過(guò)早老化。維生素 C 是生化合成膠原蛋白必要的營(yíng)養(yǎng)品。原花青素也會(huì)降低正常小鼠血中 MDA 和升高血清 SOD 活力，延長(zhǎng)果蠅平均壽 命。 原花青素具有良好的抗氧化功能，使其一定程度上延緩 D半乳糖所致小鼠衰老，使衰老模型小鼠血清、肝、腦組織中 LPO 水平均有不同程度的下降。Deters A 等在探討金縷梅皮原花青素對(duì)培養(yǎng)的人皮膚角質(zhì)細(xì)胞增殖和分化的影響研究中，得 到金縷梅皮原花青素能明顯促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞增殖，且無(wú)分化作用，促進(jìn)皮膚角質(zhì)細(xì)胞新陳代謝，延緩皮膚衰老。將其相同量注入豬的皮內(nèi)，同樣抑制胰蛋白酶水解彈性蛋白，使皮內(nèi)周?chē)膹椥缘鞍状罅恐亟ā２⑼ㄟ^(guò)體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定彈性蛋白酶（豬胰彈性蛋白酶和人白細(xì)胞彈性蛋白酶）的降低來(lái)評(píng)價(jià)原花青素對(duì)膠原蛋白保護(hù)作用。另外，花青素還保護(hù)大腦與神經(jīng)組織，因?yàn)樗锌缭窖X屏障的獨(dú)特能力；它能改善血液循環(huán)，減少炎 癥；它與膠原蛋白結(jié)合，助長(zhǎng)細(xì)胞完善，使你有靈活的關(guān)節(jié)和年青人那樣的皮膚。 抗衰老作用 當(dāng)植物成熟時(shí)，它們產(chǎn)生了叫做花青素的植物化學(xué)物質(zhì)。 ) mg/g，同樣使淋巴細(xì)胞 DNA 氧化水平從 177。在 給小鼠每天連續(xù)灌胃 200、 400mg/ 的野生山葡萄多酚（主要成分為原花青素） 30d，可顯著降低小鼠心、肝、腎、腦組織中 MDA 及脂褐質(zhì)的含量（ P），當(dāng)每天給予 400mg/ 時(shí)可極顯著提高心、腦組織 SOD 活性，降低心、腦組織脂褐質(zhì)及 MDA 含量 （ P） 。在以谷氨酸鹽誘導(dǎo)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞毒模型中，原花青素通過(guò)抗氧化作用可保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受谷氨酸鹽的損 4 害。 原花青素二聚體的抗氧化活性最強(qiáng)。–、 –、 原花青素對(duì)各種疾病的治療作用也與其超強(qiáng)的清除自由基能力和抗氧化活性密切有關(guān)。procyanidin(4β→ 6) Dimers OHOHOOHOHR 2OHO OHR 2R 1HOHOR 1R1=H,R2=OH (+)caiechin R1=OH,R2=H ()epicaiechin OHOHOR2R1OHOHprocyanidin(4β→ 8) Dimers OHOHOR 2R 1OHOHOHOHO R 1R 2OHOH葡萄籽中主要代表物原花青素的化學(xué)結(jié)構(gòu)（ n 表示以上的整數(shù)） 3 其中對(duì)葡萄籽原花青素低聚