【正文】 度非 常高。 （ 4）免疫調(diào)節(jié)功能 徐晉等將用于結(jié)合的靈芝多糖和 5 氟尿嘧啶誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出 ,該種組合可以加速并且提高肝癌細(xì)胞凋亡率 [12~13]。 （ 5）其它保健功能 吳京燕等研究表明復(fù)合靈芝多糖能非常顯著的提高輻照的小鼠體液中的白細(xì)胞及 SOD 活性，表明靈芝多糖具有拮抗輻射 [14]的功能。 靈芝多糖的提取的研究現(xiàn)狀 傳統(tǒng)的提取方法耗時(shí)較長(zhǎng)、并且耗用溶劑量大、溫度過(guò)高，容易使多糖發(fā)生分解 [16]。 酶法提?。?沈愛(ài)英等通過(guò)提取姬松茸子實(shí)體多糖的提取實(shí)驗(yàn)， 多糖的提取率高 達(dá) %，并且所需要的時(shí)間的只需要熱水提取時(shí)間的一半 ,萃取率顯著高于水萃取 ,也較高于酸、堿提取 [17]。 也有一部分專家學(xué)者 [5]研究了銀耳多糖的多種提取工藝， 研究實(shí)驗(yàn)表明 ,酶的提取效果最好 ,堿法提取排到第二，酶法提取非常顯著的縮短了提取的時(shí)間 ,使用復(fù)合酶水解與熱水提取法結(jié)合 ,提取香菇多糖，萃取時(shí)間明顯減少一半 ,而且萃取率增加 [ 18~19]。它基本上是建立模型，模擬胃和小腸的身體內(nèi)部工作環(huán)境，提 出了人工胃液和人工腸液提取中藥 (TCM)在低溫和酶催化的引入人體，使藥物進(jìn)入人體易于綜合利用活動(dòng)的混合物。 超聲波提取 ： 可以促使溶劑滲透快速進(jìn)入細(xì)胞 ,大大縮短提取時(shí)間 ,顯著 提高提取率 [22~23]。 超聲波提取優(yōu)點(diǎn)： 萃取效率高； 提取時(shí)間非常短； 提取溫度非常低； 適應(yīng)性廣； 提取液中雜質(zhì)很少 ，有效成分比較容易分離和提純； 提取的過(guò)程中操作成本非常低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著提高。動(dòng)植物多糖的超濾技術(shù)可以將多糖進(jìn)行有效的分級(jí) ，具有非常高的收率、重復(fù)性也比較好好、能源消耗低、設(shè)備比較簡(jiǎn)單、沒(méi)有污染、并且不會(huì)破壞多糖的生物活性等優(yōu)點(diǎn)。 靈芝多糖的開(kāi)發(fā)和利用現(xiàn)狀 自 1960年代以來(lái) ,研究表明 ,某 些真菌多糖的藥用價(jià)值顯著 ,沒(méi)有細(xì)胞毒性 ,應(yīng)用前景非常廣闊。近年來(lái)郭利平 [26]，陳超琴 [27]，范曉良 [28]等，這些學(xué)者在多糖的研究方面都做出了很大的貢獻(xiàn)， 但是他們的研究主要關(guān)注多糖的提取工藝 ,故本實(shí)驗(yàn)從老師所給的幾點(diǎn)影響因素入手，參考近五年的有關(guān)多糖提取方面的文獻(xiàn)， 結(jié)合不同學(xué)者多年來(lái)從不同方面對(duì)多糖測(cè)定方法的研究 ,預(yù)處理在幾個(gè)對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響 ,并提出自己的看法 不同的問(wèn)題 ， 以期為工業(yè)上預(yù)處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響因素的選擇提供依據(jù)。本次的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕菫榱丝疾椴煌膯我蛩氐奈锪项A(yù)處理對(duì)酶法提取靈芝多糖的影響，然后在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用靈芝中靈芝多糖的提取率為參考目標(biāo)，對(duì)烘烤溫度、紫外線的照射時(shí)間、物料粒度等因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)研究。粉碎是為了增加在萃取過(guò)程中反應(yīng)的接觸面積，用以獲得到較高的提取率。三種酶相比 ,纖維素酶提取靈芝多糖的效果最好 ,多糖提取容量高達(dá) / 100 ,酒精、纖維素酶 +酒精下沉的方法來(lái)比較三種方法提取靈芝多糖含量、纖維素酶水解 +酒精下沉方法提取效果是最好的 ,多糖含量高達(dá) / 100毫升 ,故本實(shí)驗(yàn)采取纖維素酶法 +醇沉法提取，探究物料粒度、烘烤溫度以及紫外照射時(shí)間與（酶法提?。╈`芝多糖提取率之間的相 關(guān)關(guān)系。最后 可以用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定其 OD 值，并且通過(guò)計(jì)算可以得到靈芝多糖的獲得率。 表 試驗(yàn)所用試劑與材料 藥品名稱 級(jí)別 生產(chǎn)廠家 濃度 無(wú)水酒精 AR 東莞市建潤(rùn)化工有限公 100% C6H12O6 AR 北京化工廠 壞水 AR 淄博建龍化工有限公司 95% 枸櫞酸鈉 AR 北京化工廠 石碳酸 AR 濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工廠 100% 芝草 市售 戴家平老百姓大藥房 主要儀器與設(shè)備 儀器與設(shè)備歸納表 。 (2)物料粒度對(duì)（酶法提取）靈芝多糖提取率之間的關(guān)系 [30~31] 精確稱量干燥的靈芝粉 g，將其置于 250 mL錐形瓶中，然后將盛有物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中適當(dāng)?shù)臏囟群婵疽欢〞r(shí)間， 取出錐形瓶，處理后的靈芝粉降至室溫時(shí)，將稱取好的靈芝粉分別通過(guò)（ 50目， 60目， 80目， 100目， 150目）的目篩，紫外線下照射 35 min，然后將通過(guò)不同大小目篩的靈芝粉分別用標(biāo)記好的錐形瓶裝按料液比 1:15加入適量的緩沖液 （ pH=）， %的纖維素 邵陽(yáng)學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 8 酶，纖維素酶降解 80分鐘，然后按照上述提取工藝流程得到靈芝粗多糖，計(jì)算得率，探究物料粒度對(duì)靈芝多糖的提取率的影響。 正交試驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 以單因素試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，以靈芝 多糖提取率為主要考察目標(biāo) , 以烘烤溫度、物料粒度、紫外線照射時(shí)間作為考察的 3 個(gè)因素，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn) 。與液體移動(dòng)移動(dòng) 、 7 毫升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液分別在 10 毫升容量瓶和擴(kuò)展能力 ,配水 ,葡萄糖含量為 、 、 、 、 毫克 /毫升的標(biāo)準(zhǔn)使用液。 （ 2） 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 邵陽(yáng)學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 9 準(zhǔn)確測(cè)量 毫升蒸餾水和 毫升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 ,然后干把它插到試管中 ,加入 毫升 ,5%的苯酚溶液 ,搖勻 ,然后把它放在冰水 ,然后立即加入 毫升濃 H2SO4,完全動(dòng)搖 ,將其放置在室溫下 15分鐘后在 100℃ 沸水 ,讓水浴加熱15 分鐘 ,然后拿出來(lái)放在冰水 15 分鐘 ,為排除干擾，根據(jù)需要設(shè)置一個(gè)空白試 驗(yàn)。 靈芝多糖的含量的測(cè)定 （ 1）換算因數(shù)測(cè)定 準(zhǔn)確稱量靈芝多糖 50 毫克完全溶解于一定量的水 ,體積 100 毫升容量瓶定容至 100 毫升 ,得到樣液 。據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》 f=。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程來(lái)計(jì)算樣本液體葡萄糖 ,葡萄糖 (ug),然后通過(guò)公式計(jì)算靈芝多糖的含量 。 100 62 .1 % 1 0 1 0 0 %M f Am? ? ? ?? ? ?公 式 ： 靈 芝 多 糖 的 得 率 （ ） M——葡萄糖的質(zhì)量； f——換算因素 （ ） ； A——稀釋倍數(shù)； 100——樣液的體積 (mL)； 10－ 6——ug 換算成 g； m——靈芝粉的質(zhì)量 （ g） 。從圖中得出標(biāo)準(zhǔn)曲線的 回歸方程是Y=+(R2=1)。 單因素試驗(yàn)結(jié)果 烘烤溫度與靈芝多糖提取率之間的關(guān)系 表 烘烤溫度與靈芝多糖提取率關(guān)系表 烘烤溫度（ ℃ ） 70 75 80 85 90 A1 A2 A3 OD 平均值 靈芝多糖得率（ %） 邵陽(yáng)學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 11 圖 烘烤溫度與靈芝多糖提取率關(guān)系圖 根據(jù) 測(cè)量的結(jié)果可以 得到表 ，以靈芝多糖的提取率為縱坐標(biāo)，用預(yù)處理因素烘烤溫度為橫坐標(biāo)畫出相應(yīng)的曲線分析圖（圖 ）。烘烤溫度的變化能夠改變物料的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，讓物料的內(nèi)部有效成分的擴(kuò)散路徑發(fā)生變化，變得更加暢通，有利于有效成分的提取。 物料粒度與靈芝多糖提取率之間的關(guān)系 表 物料粒度與靈芝多糖得率關(guān)系表 物料粒度（ 目） 50 60 80 100 150 A1 A2 A3 OD 平均值 靈芝多糖得率（ %） 邵陽(yáng)學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 12 圖 物料粒度與靈芝多糖提取率關(guān)系圖 根據(jù) 測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 ， 縱坐標(biāo)為靈芝多糖提取率，以靈芝粉的物料粒度為橫坐標(biāo)作出對(duì)應(yīng)的曲線圖（圖 ）。 從 物料粒度 靈芝多糖得率曲線圖（圖 ）中可以得知：靈芝粉物料粒度在50~80 目時(shí)，靈芝粉中的靈芝多糖的提取率大體呈上升趨勢(shì)， 80 目左右達(dá)到最大， 80 目之后又出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，經(jīng)分析討論其原因可能是物料粉碎，細(xì)胞的結(jié)構(gòu)被破壞，使其有效成分流出；但如果粒子粒徑 不斷增大 ，溶劑中的多糖含量下降，可能是因?yàn)轭w粒表面能會(huì)逐漸增加，將對(duì)一部分多 糖產(chǎn)生吸附作用， 所以，靈芝粉的最佳物料粒度應(yīng)該選擇