第二章基因工程工具酶(簡(jiǎn)化版)-展示頁(yè)
2024-11-19 22:12本頁(yè)面
【正文】 mophilus influenzae）d菌株有三種限制酶，分別怎么表示？,Hind I、HindII、HindIII,BaciUus amyloliquefaciens H Streptomyces albus I,?,一、天然DNA的制備,天然DNA的來源 ①染色體DNA ②病毒和噬菌體DNA ③質(zhì)粒DNA ④線粒體和葉綠體DNA,第二節(jié) DNA分子片段化,?,天然DNA的提取,①準(zhǔn)備生物材料。 ②第四個(gè)字母表示菌株的類型（大小寫均有），如EcoR中的R代表大腸桿菌R株。第二章 基因工程的工具酶,?,一、限制性核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn),第一節(jié) 限制性核酸內(nèi)切酶,限制 (restriction) 修飾 (modification) 限制性核酸內(nèi)切酶的生物學(xué)功能：自我保護(hù)功能(只切外來的DNA，自身DNA被甲基化后切不動(dòng)),?,核酸酶：水解斷裂多核苷酸鏈的兩個(gè)相鄰核苷酸的3,5磷酸二酯鍵 核糖核酸酶（RNase）： 脫氧核糖核酸酶（DNase）： 核酸外切酶（exonuclease）： 核酸內(nèi)切酶（endonuclease）：,限制性核酸內(nèi)切酶：,?,二、限制性核酸內(nèi)切酶的分類,?,平末端 粘性末端 1單位酶活性(1unit 1U)：在最適反應(yīng)條件下1小時(shí)完全切割1ugλDNA樣品的酶量。 同序同裂酶(識(shí)別及酶切位點(diǎn)相同): 同序異裂酶(識(shí)別位點(diǎn)相同但酶切位點(diǎn)不同): 同尾酶(酶切位點(diǎn)不同但產(chǎn)生相同的粘性末端):,?,酶切位點(diǎn)的計(jì)算：,四核苷酸識(shí)別序列：44 = 256 六核苷酸識(shí)別序列：46 = 4096 2個(gè)假設(shè)：a 隨機(jī)排列；b GC含量50% 如：用BglⅡ(A/GATC/T)酶切λDNA49Kb）: 理論上的切點(diǎn)數(shù)： 49000/4096=12個(gè) 實(shí)際情況？,?,三、限制性核酸內(nèi)切酶的命名,1973年H.Smith和D.Nathans提議 ①每一種酶都由產(chǎn)生并純化生出該酶的細(xì)菌的種屬名中的三個(gè)英文字母合起來代表： 第一個(gè)字母采用細(xì)菌屬名的第一個(gè)字母大寫； 第二和第三個(gè)字母小寫，采用細(xì)菌種名的前兩個(gè)字母； 如大腸桿菌（Escherichia coli）用Eco表示，代表從大腸桿菌中分離出的限制性內(nèi)切酶。 ③如果一個(gè)菌株有幾種限制酶，則在代表菌株的字母后用羅馬數(shù)字表示。 ②裂解細(xì)胞。,?,二、DNA的純化,瓊脂糖凝膠電
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1