第二章基因工程制藥(一)-展示頁
2024-11-19 22:12本頁面
【正文】 因工程技術(shù)生產(chǎn)的藥物,包括醫(yī)用活性蛋白和多肽： 免疫性蛋白，各種抗原和單克隆抗體； 細(xì)胞因子，干擾素、白介素、生長因子； 激素: 胰島素、生長激素； 酶類: 尿激酶、鏈激酶、蚓激酶、超氧化物歧化酶。,2,第二章 基因工程制藥,應(yīng)用基因工程技術(shù)可十分方便且有效地解決上述提到的問題，從量、質(zhì)上都可以得到改進(jìn)，且可以創(chuàng)造全新物質(zhì)。第二章 基因工程制藥 (一）,1,第二章 基因工程制藥,一、概述,生物技術(shù)的核心就是基因工程，基因工程技術(shù)最成功的應(yīng)用就是用于生物治療的新型生物藥物的研制。 傳統(tǒng)生物藥物由于來源及制備上的困難、價(jià)格等因素的影響，此外在制備過程可能受到的病毒、衣原體、支原體等的感染等問題，促使人們尋求安全、實(shí)用、療效可靠的新方法來制備生物藥物。 癌癥、病毒性疾病、心血管疾病以及內(nèi)分泌等方面的預(yù)防、治療和診斷已可通過基因工程技術(shù)獲得。,4,第二章 基因工程制藥,利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點(diǎn),可以大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽（如胰島素、干擾素、細(xì)胞因子等），為臨床使用提供有效的保障； 可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì)，以便對(duì)其生理、生化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入的研究，從而擴(kuò)大這些物質(zhì)的應(yīng)用范圍； 利用基因工程技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)、挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)；,5,第二章 基因工程制藥,利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點(diǎn),內(nèi)源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用時(shí)存在的不足之處，可通過基因工程和蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造和去除； 如白細(xì)胞介素2的第125位半胱氨酸是游離的，有可能引起SS鍵的錯(cuò)配而導(dǎo)致活性下降，如將此半胱氨酸改為絲氨酸或丙氨酸，白細(xì)胞介素2的活性以及熱穩(wěn)定性均有提高； 可獲得新型化合物，擴(kuò)大藥物篩選來源。,7,第二章 基因工程制藥,基因工程藥物制造的主要程序,獲得目的基因,組建重組質(zhì)粒,構(gòu)建基因工程菌或細(xì)胞,培養(yǎng)工程菌,產(chǎn)物分離純化,除菌過濾,半成品檢驗(yàn),成品檢驗(yàn),原料包裝,8,第二章 基因工程制藥,9,第二章 基因工程制藥,基因工程藥物生產(chǎn)的上游和 下游技術(shù),上游技術(shù)：主要指的是目的基因分離、工程菌（或細(xì)胞）構(gòu)建。,10,第二章 基因工程制藥,三、目的基因的獲得,對(duì)于原核生物，其基因總量不大，可以選用合適的限制性核酸內(nèi)切酶切下目的基因。真核細(xì)胞中基因總量較大，從染色體中直接分離純化目的基因極為困難。,11,第二章 基因工程制藥,克隆真核基因的方法,逆轉(zhuǎn)錄法 化學(xué)合成法,12,第二章 基因工程制藥,什么是逆轉(zhuǎn)錄法,先分離純化目的基因的mRNA，再反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)cDNA，然后進(jìn)行互補(bǔ)cDNA 的克隆表達(dá)。 該序列不含內(nèi)含子。 但是mRNA 的3’末端常含有一多聚腺苷酸（polyA）組成的末端，長達(dá)20250 個(gè)腺苷酸，足以吸附于寡聚胸苷酸（Oligo dT）纖維素上，從而可以用親和層析法將mRNA 從細(xì)胞總RNA 上分離出來，可得到純度較高的mRNA。 再以低鹽溶液和蒸餾水將其洗脫，經(jīng)過兩次寡聚dT，可得到較純的mRNA。 在合成反應(yīng)體系中加入一種放射性標(biāo)記的dNTP，在反應(yīng)中以及反應(yīng)后可通過測定放射性標(biāo)記的dNTP摻入量，計(jì)算出cDNA的合成效率。 一次好的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可使寡聚dT選出的mRNA有5%~30%被拷貝。 由于第一鏈cDNA鏈3‘末端往往形成一個(gè)發(fā)夾形結(jié)構(gòu)，所以，可以從這一點(diǎn)開始合成cDNA第二鏈。該酶不能消化單鏈或雙鏈DNA。核酸酶S1專一性切除單鏈DNA，因此用它可以切除發(fā)夾結(jié)構(gòu)。,20,第
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