【正文】 性的管數(shù)，查 MPN表，報(bào)告每100ml（ g）大腸菌群的 MPN值。 1℃ 培養(yǎng) 24177。 ? 證實(shí)試驗(yàn)：挑取平板上的可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。 ? 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36177。 1℃ 培養(yǎng) 48177。 ? 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。 ? 如需要進(jìn)一步檢測(cè) Vero毒素基因的存在，可通過(guò)接種 Vero細(xì)胞或 Hela細(xì)胞，觀察細(xì)胞病變進(jìn)行判定，或可使用基因探針檢測(cè)和聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）檢測(cè)法。 ? 大腸桿菌： MR + /VP 枸椽酸鹽試驗(yàn)： ? 某些細(xì)菌能利用枸椽酸鹽作為碳源，及磷酸銨作為氮源，將枸椽酸鹽分解為二氧化碳，培養(yǎng)基反應(yīng)后成堿性，由于指示劑的作用，培養(yǎng)基變?yōu)樘m色。 甲基紅（ Methyl Red）試驗(yàn) ? 腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過(guò)程中產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基 PH值下降至 ，使甲基紅指示劑變紅。 ? 試驗(yàn)方法：將待試純培養(yǎng)物小量接種于試驗(yàn)培養(yǎng)基管，于 36177。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來(lái)。大腸桿菌為革蘭氏陰性。 2h,觀察試管中是否產(chǎn)氣。 4 LST肉湯： 于 36177。 3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯： 于 36177。 將 MRVP培養(yǎng)物的剩余部分再培養(yǎng) 48h滴加 5 滴甲基紅溶液。 2h。 2 MRVP培養(yǎng)基： 在 36177。 1℃ 培養(yǎng) 24177。 1℃ ， 1824h MUG陰性培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂 ↓ ↓ 生化反應(yīng)鑒定 血清凝集鑒定或膠乳凝集試驗(yàn) 生化試驗(yàn)： 將斜面培養(yǎng)物移種到下列培養(yǎng)基中進(jìn)行生化試驗(yàn)。 1℃ ， 1824h 104， 105， 106稀釋度涂布 TCSMAC ↓36177。 ? 在檢測(cè)過(guò)程中，也可以在選擇性增菌后，取出 5mL增菌液，經(jīng) 100℃ 水浴 15分鐘滅活后，供自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫測(cè)試（ VIDAS），迅速獲得初步結(jié)果，陽(yáng)性反應(yīng)者需作進(jìn)一步證實(shí)。 1℃ 培養(yǎng) 18~24小時(shí)，出現(xiàn)產(chǎn)氣，且無(wú)熒光者，分離到普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂。 ? 可疑 EHEC O157:H7菌落扁平，透明或半透明，邊緣光滑，呈淡褐色中心，直徑約 2mm。于 36177。 分離 ? 將 mEC肉湯培養(yǎng)物 10倍遞增稀釋。于 41177。 ? MUGLST肉湯： LST肉湯中添加 4甲基傘形酮 βD葡萄糖醛酸苷（ MUG），使終濃度為 。 腸出血性大腸桿菌 腸出血性大腸桿菌 O157: H7的檢驗(yàn)方法： 培養(yǎng)基制備 ? 改良 EC新生霉素增菌肉湯 （ mEC）： EC肉湯滅菌后添加 20mg/mL過(guò)濾除菌的新生霉素，使終濃度為 20μg/mL。 ?1996年 O157： H7在日本引起萬(wàn)人的食物中毒，此外，美國(guó)、加拿大、瑞典、澳大利亞、英國(guó)等國(guó)家和地區(qū)相繼報(bào)道了 EHEC O157： H7的散發(fā)性感染和爆發(fā)流行。 ?腸出血性大腸桿菌（ Enterohemorrhagic E. coli，EHEC)可引起散發(fā)性或爆發(fā)性出血性結(jié)腸炎。 腸致病性大腸桿菌 腸侵襲性大腸桿菌（ Enteroinvasive E. coli，EIEC) ?EIEC的多數(shù)菌株無(wú)動(dòng)力，生化反應(yīng)和抗原結(jié)構(gòu)均類似痢疾桿菌。 VT毒素具有神經(jīng)毒素、細(xì)胞毒素和腸毒素性。 ?腸致病性大腸桿菌（ Enteropathogenic E. coli， EPEC)是嬰兒腹瀉的主要病原菌，具有高度傳染性，嚴(yán)重者可致死，成人少見。腹瀉常為自限性，一般 2~3d即愈。 引起腹瀉、出血性腸炎。 腸侵襲性大腸桿菌（ Enteroinvasive E. coli)。 ?致病性大腸桿菌：腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ Enterotoxigenic E. coli)。一般情況下，多不致病，是人和動(dòng)物腸道中的常居菌。 ?能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，氧化酶試驗(yàn)陰性，觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性。C。 ?在普通培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)。第八章 食品中致病菌和病毒 腸桿菌科 ?腸桿菌科是存在于人和動(dòng)物腸道或自然界中的一群生物學(xué)性狀很相似的革蘭氏陰性短小桿菌。無(wú)芽孢，多數(shù)有周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。 ?培養(yǎng)溫度為 35186。 ?需氧或兼性厭氧。 ?大腸桿菌 E. coli是腸道正常菌群。 ?在一定條件下，可引起腸道道外感染。 腸致病性大腸桿菌（ Enteropathogenic E. coli)。 腸出血性大腸桿菌（ Enterohemorrhagic E. coli)。 腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ Enterotoxigenic E. coli， ETEC) ?引起嬰幼兒和旅游者腹瀉，出現(xiàn)輕度水瀉，也可呈嚴(yán)重霍亂樣癥狀。 ?鑒定 ETEC主要測(cè)定大腸桿菌腸毒素，血清型有一定的參考意義。 EPEC產(chǎn)生 VT毒素。 ?鑒定 EPEC根據(jù)臨床表現(xiàn)和血清型。 ?EIEC可引起豚鼠角結(jié)合膜炎，臨床上可借此協(xié)助鑒定 EIEC。主要菌型是 O157： H7，還可有 O2 O11 O10O145等。 ?我國(guó)于 1999年在蘇、皖、魯、豫發(fā)生爆發(fā)流行。 ? 改良山梨醇麥康凱瓊脂（ TCSMAC）：山梨醇麥康凱瓊脂加入過(guò)濾除菌的 1%亞碲酸鉀溶液，使終濃度 ，頭孢克污，使終濃度為 。 增菌培養(yǎng) ? 稱取 25克樣品放入 225mL mEC中，均質(zhì)。 1℃ 培養(yǎng)1824小時(shí)。從 104， 105， 106稀釋度，各取 TCSMAC平板。 1℃ 培養(yǎng) 18~24小時(shí)。 鑒定 ? 挑取 TCSMAC上的可疑菌落，接種 MUGLST，于 36177。 ? 對(duì)純菌落用 EHEC O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或膠乳凝集試劑作凝集試驗(yàn)，必要時(shí)進(jìn)行生化試驗(yàn)。 EHEC O157:H7檢驗(yàn)程序圖解 檢樣 25g ↓ mEC225mL →酶聯(lián)熒光免疫測(cè)試 VIDAS快速篩選 ↓41177。 1℃ ， 1824h 挑取 510個(gè)可疑菌落接種 MUGLST ↓36177。 1 色氨酸肉湯 ：在 36177。 2h后 ,加 Kovacs氏試劑 ～ ,上層出現(xiàn)紅色為靛基質(zhì)陽(yáng)性反應(yīng)。 1℃ 培養(yǎng) 48177。以無(wú)菌操作移取培養(yǎng)物 1 mL至 13mm 100mm試管中 ,加 5％ α萘酚乙醇溶液 ,40％氫氧化鉀溶液 ,振搖試管后靜置 2h,如出現(xiàn)伊紅色 ,為 VP試驗(yàn)陽(yáng)性。如培養(yǎng)物變紅色 ,為甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性 ,若變黃色則為陰性反應(yīng)。 1℃ 培養(yǎng) 96h記錄有無(wú)生長(zhǎng)。 1℃ 培養(yǎng) 48177。 5