微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程(20xx年版)-展示頁(yè)
2024-08-09 16:21本頁(yè)面
【正文】 度和準(zhǔn)確度不及薄膜過(guò)濾法和平皿法，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒(méi)有適宜計(jì)數(shù)方法的情況下使用，本法不適用霉菌計(jì)數(shù)。 培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 培養(yǎng)條件和計(jì)數(shù)方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過(guò)100cfu。 陰性對(duì)照 取試驗(yàn)用的稀釋液1ml照上述薄膜過(guò)濾法操作，作為陰性對(duì)照。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。若供試品所含的菌數(shù)較多時(shí)，可取適宜稀釋級(jí)的供試液1ml,過(guò)濾?？倹_洗量不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。水溶性供試液過(guò)濾前先將少量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。 薄膜過(guò)濾法 ，直徑約為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。以最高的平均菌落數(shù)，計(jì)算1g、1ml或10cm2供試品中所含的微生物，取兩位有效數(shù)字報(bào)告。若同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)平板倒置于20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至7天。C左右的瓊脂傾注上述各個(gè)平皿約15ml，以順時(shí)針或反時(shí)針?lè)较蚩焖俎D(zhuǎn)動(dòng)平皿（勿使培養(yǎng)基溢出）使供試液與培養(yǎng)基混勻，放置，待凝。C水浴中，備用。如果陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。 平皿法 取規(guī)定量供試品，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液的制備和菌數(shù)測(cè)定，每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)至少制備2個(gè)平板。除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；膜劑為100cm2；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。 檢查法 檢驗(yàn)量檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g、ml、cm2）。以此類(lèi)推，根據(jù)供試品污染程度，可稀釋至1:1000、1:10000等適宜稀釋級(jí)。 腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品取供試品10g，置45℃水浴中，振搖，使溶解，制成1：10的供試液。 油脂類(lèi)供試品 取供試品，加入無(wú)菌十四烷酸異丙酯使溶解，或與最少量并能使供試品乳化的無(wú)菌聚山梨酯80或其他無(wú)抑菌性的無(wú)菌表面活性劑充分混勻。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。 水不溶性非油脂類(lèi)供試品取供試品，－蛋白胨緩沖液或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。 水溶性供試試品取供試品，－蛋白胨緩沖液或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。常用的供試液制備方法如下。供試液制備若需加溫時(shí)，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過(guò)45℃。 操作前先用乙醇棉球擦手，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、袋等的開(kāi)口處周?chē)珊笥脺缇氖中g(shù)鑷或剪將供試品啟封。 操作人員進(jìn)入一更，用洗手液或肥皂洗手，烘干。每次試驗(yàn)所用物品必須事先計(jì)劃，準(zhǔn)備足夠用量，避免操作中出入操作間。 試液 消毒液 A．% 新潔爾滅溶液 B．75%乙醇溶液 稀釋液、試劑及配制A．：、加純化水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，1210C滅菌15分鐘。 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、移液槍及吸頭、薄膜過(guò)濾器等。檢查時(shí)，按已驗(yàn)證的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測(cè)定?！?抽樣：照《取樣標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》進(jìn)行。中心化驗(yàn)室檢驗(yàn)人員：嚴(yán)格按照本規(guī)程執(zhí)行檢驗(yàn)操作。3 范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物限度檢驗(yàn)。1 目的規(guī)范微生物限度檢驗(yàn)操作，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。2 依據(jù)《中國(guó)藥典》2015版。4 責(zé)任中心化驗(yàn)室負(fù)責(zé)人：對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。5 程序 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：《中國(guó)藥典》2015版。6 內(nèi)容 需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)方法包括平皿法、薄膜過(guò)濾法和最可能數(shù)法（MPN法）。 設(shè)備、儀器及用具 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30～350C）、生化培養(yǎng)箱（20～250C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、脈動(dòng)真空滅菌柜、紫外燈等。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。B．聚山梨酯80C．無(wú)菌十四烷酸異丙酯D． 培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 操作方法 試驗(yàn)前準(zhǔn)備 將供試品及所有已滅菌的平皿、錐形瓶、試管、移液槍吸頭（1ml、10ml）、量筒、稀釋液、培養(yǎng)基等移至傳遞窗內(nèi)。 開(kāi)啟微生物檢測(cè)室紫外燈和空調(diào)凈化系統(tǒng)，并使其工作不低于30min。進(jìn)入二更，% 新潔爾滅溶液
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