【正文】 卡尺；使用的抑菌圈測量儀應(yīng)經(jīng)過檢定，并符合檢定規(guī)程的要求，操作時(shí)應(yīng)按儀器的操作規(guī)程進(jìn)行：使用游標(biāo)卡尺測量時(shí)，眼睛視線應(yīng)與讀數(shù)刻度垂直，用卡尺的尖端與抑菌圈直徑的切點(diǎn)成垂直方向測量。將雙碟托盤水平平穩(wěn)地移入培養(yǎng)箱中間位置，在35～37℃或該藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的溫度下培養(yǎng)至所需時(shí)間。每種溶液各用1支毛細(xì)滴管。滴加溶液至鋼管口平滿，注意滴加溶液的間隔不可過長，否則因鋼管內(nèi)溶液的擴(kuò)散時(shí)間不同會影響測定結(jié)果。 滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品溶液順序，因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)方法不用而異。 滴加抗生素溶液 每批供試品取不少于6個(gè)雙碟，滴加溶液用滅菌毛細(xì)滴管或微量加樣器（調(diào)節(jié)加樣量約為200～300181。如無鋼管放置器，可用小眼科鑷子夾持鋼管，輕輕地放置在培養(yǎng)基上，相應(yīng)劑量的鋼管對角均勻放置。取出加有底層培養(yǎng)基的雙碟，用滅菌大口5ml、10ml吸管或其他適宜分裝器，吸取菌層培養(yǎng)基5ml，加于底層培養(yǎng)基上，使其均勻攤布，用干燥陶瓦蓋覆蓋，放置20～30分鐘，待凝固。 菌層 取出試驗(yàn)用菌懸液，按預(yù)試好的加菌量[（）法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌直徑在18～22mm，（）法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15～18mm]，用滅菌吸管吸取懸液適量，加入已融化并保溫在水浴中（水浴溫度，細(xì)菌為48～50℃。培養(yǎng)基應(yīng)在水浴中或微波爐內(nèi)融化，避免直火加熱。但所選用的濃度必須在劑量反應(yīng)直線范圍內(nèi)。，每次加液至接近量瓶刻度前，稍放置片刻，待瓶壁的液體完全流下，再準(zhǔn)確補(bǔ)加至刻度。 50ml量瓶，稀釋至刻度第一步 精密量取5ml（1000u/ml） 100 u/ml 50ml量瓶，稀釋至刻度第一步 精密量取5ml（1000u/ml） 10 u/ml（H） 100ml量瓶，稀釋至刻度第一步 精密量取5ml（1000u/ml） 5 u/ml（L） 量取供試品溶液盡量使用刻度移液管，正式量取前要用供試液流洗2～3次，吸取供試溶液后，用濾紙將外壁多余液體拭去，從起始刻度開始放溶液。每步稀釋，量取量不得少于2ml，稀釋步驟一般不超過3步。 稀釋 稀釋操作應(yīng)遵照容量分析的操作規(guī)程進(jìn)行。g/ml）；P為標(biāo)準(zhǔn)品的純度或供試品的估計(jì)效價(jià)（u/mg或181。稱樣量的計(jì)算： W= V 標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的稱量盡量一次取樣稱取，不得將已取出的稱取物倒回原容器內(nèi)。6 操作法 稱量 稱量前先將標(biāo)準(zhǔn)品從冰箱中取出，使其溫度與室溫平衡。試驗(yàn)菌的菌齡對抑菌圈邊緣清晰度有一定影響，應(yīng)保持菌種新鮮。 肺炎克雷伯氏菌[Klebosiella pneumoniae CMCC（B）46 117]懸液 取肺炎克雷伯氏菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照金黃色葡萄球菌菌懸液項(xiàng)下的方法制備菌懸液，供當(dāng)日使用。置4℃冰箱中保存，可使用1～2個(gè)月。置4℃冷藏箱保存，可使用3天。 短小芽孢桿菌[Bacillus subtilis CMCC（B）63 202]懸液 取短小芽孢桿菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照上述方法制備芽孢懸液。此菌液為濃菌液。 菌懸液的制備 枯草芽孢桿菌[Bacillus subtilis CMCC（B）63 501]懸液 取枯草芽孢桿菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，加滅菌水1～2ml將菌苔洗下，制成懸液，用吸管將此懸液接種至盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶內(nèi)，均勻攤布，在35～37℃培養(yǎng)7天。 將已接種的細(xì)菌管置35～37℃培養(yǎng)22～24小時(shí)，霉菌管一般置24～25℃霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7天。塞上管塞，左手將菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂斜面1支，照上述操作打開管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部，由底向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折蛇形移動(dòng)，使細(xì)菌接種在斜面的表面上。 點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈等，左手握住菌種斜面，將管口靠近火焰上方，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅約30秒種，隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。在標(biāo)簽上注明菌名及接種日期。菌落不典型時(shí)，可進(jìn)行平板分離單菌落。 取滅菌鑷子，在酒精燈火焰上方，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取1支滅菌毛細(xì)滴管，在火焰旁吸取營養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干菌塊攪動(dòng)是其溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，分別接種至營養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi)，并將毛細(xì)滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營養(yǎng)瓊脂斜面置35～37℃培養(yǎng)22～24小時(shí)。 將凍干菌種管外壁用碘酒（碘狀）擦拭消毒，稍干，用75%乙醇棉球擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。5 試驗(yàn)菌 菌種的復(fù)蘇 檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種為冷凍干燥品，由中國藥品生物制品檢定所提供。臨用時(shí)按照使用說明進(jìn)行配制，但應(yīng)注意核對培養(yǎng)基的pH，必要時(shí)需調(diào)節(jié)pH，使其符合規(guī)定。中國藥典2005年版二部附錄的抗生素生物檢定法中收載了13種不同處方的培養(yǎng)基及制備方法。4 培養(yǎng)基 配制培養(yǎng)基的各成分原料質(zhì)量對抑菌圈邊緣清晰度及試驗(yàn)結(jié)果影響較大，因此應(yīng)對原材料進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，挑選適當(dāng)?shù)钠放剖褂谩?磷酸鹽緩沖液（） ，加水使成1000ml，濾過。 磷酸鹽緩沖液（） 取磷酸氫二鈉（Na2HPO43 試液 滅菌緩沖液 制備緩沖液的試劑應(yīng)為分析純，配制后的緩沖液應(yīng)澄明，分裝于玻璃容器內(nèi)，經(jīng)121℃蒸氣滅菌30分鐘備用。用于試驗(yàn)菌的接種傳代或菌懸液制備。 游標(biāo)卡尺 ，長度125mm。 天平 分析天平，經(jīng)計(jì)量檢定。 滴管 用玻璃管拉制，管口光滑。 稱量瓶 重量在10g以下。 玻璃容器 包括定量移液管、刻度吸管、容量瓶等，均應(yīng)符合“常用玻璃量器國家計(jì)量檢定規(guī)程”的規(guī)定。使用后應(yīng)立即置5%石炭酸或1:1000新潔爾溶液中消毒后，再按玻璃容器的常規(guī)洗滌法洗滌。設(shè)置漂移溫度為35～37℃或24～26℃，依各品種要求而定，箱內(nèi)網(wǎng)狀隔板上放置帶孔的玻璃板并調(diào)整水平。置鋼管的玻璃管應(yīng)定期干烤滅菌。應(yīng)保持清潔，防止抗生素污染。放置于無菌或半無菌室的操作平臺上，鋼管下落時(shí)應(yīng)垂直平穩(wěn)、位置正確。每次使用后應(yīng)置1:1000新潔爾溶液內(nèi)，浸泡2小時(shí)以上，滅菌后再洗滌，先用水洗滌，超聲波超聲30分鐘或用沾有去污粉的紗布條串擦內(nèi)外壁，水沖洗，瀝干，再用蒸餾水沖洗3次后，置帶蓋的容器內(nèi)，在150℃～160℃干熱滅菌2小時(shí)，備用。）mm，每套鋼管重量差異不超過177。）mm；外徑（177。 鋼管 內(nèi)徑（177。用過的雙碟經(jīng)高壓滅菌倒出培養(yǎng)基后，置清洗液中浸泡過夜，沖洗，瀝干，至150℃～160℃干熱滅菌2小時(shí)或高壓121℃蒸氣滅菌30分鐘，備用。 雙碟 內(nèi)徑約90mm，高16～17mm硬質(zhì)玻璃或塑料培養(yǎng)平皿，碟底厚薄均勻，水平透明，無色斑氣泡。操作臺應(yīng)穩(wěn)固，臺面用玻璃