【正文】 液至100 mL，用勻漿儀打碎，搖勻，制成1∶10的供試液。BairdParker平板：菌落呈圓形，光滑，凸起，濕潤，直徑為2—3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍一混濁帶，在其外層有一透明帶。血瓊脂培養(yǎng)基：成分：營養(yǎng)瓊脂100ml脫纖維羊血（或兔血）10ml制法：將營養(yǎng)瓊脂加熱融化，待冷至50℃左右無菌操作加入脫纖維羊血（或兔血）搖勻，制成平板，置冰箱內(nèi)備用。金黃色葡萄球菌—為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽孢，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。 黑曲霉 取新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 d，%無菌氯化鈉溶液3～5 mL，將孢子洗脫。用于控制菌驗證時制成每1 mL含菌數(shù)為 白色念珠菌 取新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48 h。方法與結(jié)果 菌液的制備[4] 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌取新鮮培養(yǎng)物接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24 h。 培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基。儀器與試藥 菌種金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)10123]，均購自中國藥品生物制品檢定所。驗證表明，采用培養(yǎng)基稀釋法對本品進行檢查，可使污染的微生物能被順利檢出，常規(guī)法則可用于控制菌的檢查。處方中的老鸛草、黃柏具有一定的抑菌作用[1，2]，若用常規(guī)法對其進行微生物限度檢查，結(jié)果將不能真實反映樣品的污染情況[3]。本品味特異，具有化滯止瀉功效。微生物限度檢查。結(jié)論 該法簡單、快捷，可用于康腹止瀉片的微生物限度檢查，有效控制其質(zhì)量。結(jié)果 該法能有效消除康腹止瀉片在檢驗條件下對細(xì)菌、真菌及酵母菌的抑制作用。第二篇：康腹止瀉片微生物限度檢查法康腹止瀉片微生物限度檢查法【摘要】目的 建立康腹止瀉片微生物限度檢查法。 如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上生長霉菌菌落數(shù)或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上生長細(xì)菌菌落數(shù)超過該品種項下微生物限度規(guī)定時，經(jīng)復(fù)試2 次，如3 次結(jié)果平均值仍超過規(guī)定，應(yīng)判為供試品不符合規(guī)定。9 結(jié)果判斷： 細(xì)菌菌落數(shù)、霉菌菌落數(shù)、控制菌三項均符合該品種微生物限度項下的規(guī)定，應(yīng)判為供試品符合規(guī)定；其中任何一項不符合該品種項下規(guī)定，應(yīng)判供試品不符合規(guī)定。凡乳糖管產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24177。1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18~24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實試驗。2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進行。每一稀釋度接種三管，置36177。④ 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或標(biāo)本污染情況的估計，選擇3 個合適的稀釋度，每個稀釋度接種三管。③ 另取1ml 滅菌吸管，按上述操作順序，做10 倍遞增稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好在均質(zhì)器中以8000—10000r/min 的速度處理1min，作成1：10 的均勻稀釋液。 控制菌檢查除另有規(guī)定外，取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、1ml、cm2），直接或處理后接種，經(jīng)增菌、分離培養(yǎng)后，進行革蘭氏染色、生化試驗等項檢查。 培養(yǎng)基稀釋法：取供試液（原液或1：10 供試液）3 份，每份各1ml，分別注入5 個平皿內(nèi)（）每個平皿中傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)，計數(shù)，每1ml 注入的5 個平板點計的菌落數(shù)之和即為每1ml 的菌落數(shù)，共得3 組數(shù)據(jù)，以3 份供試液菌落數(shù)的平均值乘以稀釋倍數(shù)報告。如只有1 個稀釋級菌落數(shù)在30300（30100）之間時，將該稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告，如同時有兩個稀釋級在30300（30100）之間時，按下式計算兩級比值。 點計后，計算各稀釋級的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。 細(xì)菌培養(yǎng)時間為48 小時，分別在24 小時及48 小時點計菌落數(shù)，一般以48 小時菌落數(shù)為準(zhǔn)，霉菌培養(yǎng)時間為72 小時，分別在48 小時及72 小時點計菌落數(shù)，一般以72 小時菌落數(shù)為準(zhǔn)。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計數(shù)，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌計數(shù)。 細(xì)菌、霉菌計數(shù)：，進一步稀釋成1：101：103 等適宜的稀釋級。8 檢查法： 除另有規(guī)定外，細(xì)菌的培養(yǎng)溫度為3035℃，霉菌的培養(yǎng)溫度為2528℃，控制菌的培養(yǎng)溫度為35177。對照用菌液：控制菌檢查均應(yīng)作相應(yīng)已知菌的對照試驗，對照菌株為大腸桿菌[CMCC（B）441022]。稀釋劑：%無菌氯化鈉溶液。 培養(yǎng)基的管理、配制應(yīng)符合檢定菌、培養(yǎng)基管理規(guī)程、培養(yǎng)基配制規(guī)程。2 實驗用具：電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水溫箱、試管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管架、注射器、針頭、注射器盒、研缽、75%酒精棉球、紫外燈（365nm 波長）。三、職責(zé)：品管微生物檢驗員對本標(biāo)準(zhǔn)的實施負(fù)責(zé)。第一篇：微生物限度檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程微生物限度檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程一、目的：建立微生物限度檢查的基本操作規(guī)程，為微生物檢查人員提供正確的操作規(guī)程。二、適用范圍：適用于品管化驗室的微生物限度檢查。四、正文： 定義：微生物限度檢查法：系指非規(guī)定滅菌制劑及其原輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法，包括染菌量及控制菌的檢查。3 培養(yǎng)基： 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、乳糖膽鹽培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基。試液：甲基紅試液、a奈酚乙醇試液、40%氫氧化鉀溶液、靛基質(zhì)試液。供試品溶液的制備：取供試品（供試品如為固體，置研缽中研磨成細(xì)粉）放入試管中，加入適量的稀釋劑制成1：10 濃度的供試品溶液。取相應(yīng)菌株的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1 白金耳，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)1820 小時，稀釋至1：106，對照菌的加入量為50100 個。1℃。分別取連續(xù)三級10 倍稀釋的供試液各1ml，置直徑約90mm 的平皿中，再注入約45℃的培養(yǎng)基約15ml，混勻，等凝固后，倒置培養(yǎng)，每個稀釋級應(yīng)作2~3 個平皿。 菌數(shù)測定陰性對照試驗取供試驗用的稀釋劑各1ml，置4 個無菌平皿中，分別按細(xì)菌、霉菌計數(shù)用的培養(yǎng)基制備平板，培養(yǎng)，檢查，不得長菌。菌落如蔓延生長成片，不宜計數(shù)。 菌數(shù)報告規(guī)則：細(xì)菌宜選取平均菌落數(shù)在30300 之間的稀釋級，霉菌宜選取平均菌落數(shù)在30100 之間的稀釋級，作為報告菌數(shù)計算的依據(jù)。比值=低稀釋級平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)高稀釋級平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù).當(dāng)比值≤2 時，以兩稀釋級的均值報告，當(dāng)比值＞2 時以低稀釋級平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告，如同時有3 個稀釋級的平均菌落數(shù)均在30300（30100）之間時，以后兩個稀釋級計算級間比值，如各稀釋級的平均菌落數(shù)均不在30300（30100）之間，以最接近30 或300 的稀