【正文】 其純度（u/mg或181。對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果不符合規(guī)定的樣品，應(yīng)有可靠性測(cè)驗(yàn)及可信限率均符合規(guī)定，且測(cè)定結(jié)果在估計(jì)效價(jià)（原料藥）或標(biāo)示量（制劑）177。（）法的劑間變異分析為試品間、回歸和偏離平行三項(xiàng)；（）法還需再分析二次曲線和反向二次曲線，如用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑，可用（）法和（）法的專用數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和結(jié)果計(jì)算。當(dāng)用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑時(shí)，應(yīng)將測(cè)得數(shù)據(jù)按相應(yīng)劑量濃度以列表形式記錄。滴加溶液至鋼管口平滿，注意滴加溶液的間隔不可過長(zhǎng)，否則因鋼管內(nèi)溶液的擴(kuò)散時(shí)間不同會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。取出加有底層培養(yǎng)基的雙碟，用滅菌大口5ml、10ml吸管或其他適宜分裝器，吸取菌層培養(yǎng)基5ml，加于底層培養(yǎng)基上，使其均勻攤布，用干燥陶瓦蓋覆蓋，放置20～30分鐘，待凝固。，每次加液至接近量瓶刻度前，稍放置片刻，待瓶壁的液體完全流下，再準(zhǔn)確補(bǔ)加至刻度。g/ml）；P為標(biāo)準(zhǔn)品的純度或供試品的估計(jì)效價(jià)（u/mg或181。試驗(yàn)菌的菌齡對(duì)抑菌圈邊緣清晰度有一定影響，應(yīng)保持菌種新鮮。 短小芽孢桿菌[Bacillus subtilis CMCC（B）63 202]懸液 取短小芽孢桿菌工作用菌種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照上述方法制備芽孢懸液。塞上管塞，左手將菌種管放下，取營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面1支，照上述操作打開管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部，由底向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折蛇形移動(dòng)，使細(xì)菌接種在斜面的表面上。 取滅菌鑷子，在酒精燈火焰上方，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取1支滅菌毛細(xì)滴管，在火焰旁吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干菌塊攪動(dòng)是其溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，分別接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi)，并將毛細(xì)滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面置35～37℃培養(yǎng)22～24小時(shí)。中國(guó)藥典2005年版二部附錄的抗生素生物檢定法中收載了13種不同處方的培養(yǎng)基及制備方法。3 試液 滅菌緩沖液 制備緩沖液的試劑應(yīng)為分析純，配制后的緩沖液應(yīng)澄明，分裝于玻璃容器內(nèi)，經(jīng)121℃蒸氣滅菌30分鐘備用。 滴管 用玻璃管拉制，管口光滑。設(shè)置漂移溫度為35～37℃或24～26℃，依各品種要求而定，箱內(nèi)網(wǎng)狀隔板上放置帶孔的玻璃板并調(diào)整水平。每次使用后應(yīng)置1:1000新潔爾溶液內(nèi)，浸泡2小時(shí)以上，滅菌后再洗滌，先用水洗滌，超聲波超聲30分鐘或用沾有去污粉的紗布條串擦內(nèi)外壁，水沖洗，瀝干，再用蒸餾水沖洗3次后，置帶蓋的容器內(nèi)，在150℃～160℃干熱滅菌2小時(shí)，備用。用過的雙碟經(jīng)高壓滅菌倒出培養(yǎng)基后，置清洗液中浸泡過夜，沖洗，瀝干，至150℃～160℃干熱滅菌2小時(shí)或高壓121℃蒸氣滅菌30分鐘，備用?？股匦r(jià)以“單位（u）”或“微克（181?？股匚⑸餀z定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程作者：日期：抗生素微生物檢定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 簡(jiǎn)述抗生素微生物檢定法系在適宜條件下，通過檢測(cè)抗生素對(duì)微生物的抑制作用，計(jì)算抗生素活性（效價(jià)）的方法。此法系根據(jù)抗生素在一定的濃度范圍內(nèi)，其濃度或濃度的數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換值與試驗(yàn)菌生長(zhǎng)產(chǎn)生的濁度（濁度與細(xì)菌群體質(zhì)量及細(xì)菌細(xì)胞容積的增加之間存在直接關(guān)系）之間存在線性關(guān)系而設(shè)計(jì)，通過測(cè)定培養(yǎng)后細(xì)菌濁度值的大小，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品對(duì)試驗(yàn)菌生長(zhǎng)抑制的程度，計(jì)算出供試品的效價(jià)。碟底平度檢查，可將雙碟放在水平臺(tái)上，下墊一張白紙，碟內(nèi)加水2～3ml，再滴加藍(lán)墨水，觀察藍(lán)色深淺是否一致。內(nèi)外壁及兩端面光潔平坦，管壁厚薄一致。 恒溫培養(yǎng)箱 以隔水式為宜，溫度平穩(wěn)，波動(dòng)小。用畢先用水沖洗、瀝干，置清潔液浸泡2小時(shí)以上，然后分別用水、蒸餾水或去離子說沖洗3次，置潔凈平皿中，在120℃干熱滅菌3小時(shí)，待冷至60～70℃時(shí)，取出置于干燥中備用。超凈工作臺(tái)須置潔凈工作室或半無菌室內(nèi)。制成的培養(yǎng)基不應(yīng)有沉淀，如產(chǎn)生沉淀，可在配制培養(yǎng)基后，于115℃加熱20分鐘溶化，趁熱用紙漿減壓或適宜方法過濾，調(diào)整pH值，分裝滅菌備用。點(diǎn)燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上燒灼紅熱，用滅菌毛細(xì)滴管吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，滴在上述灼熱的菌種管封口端，使其驟冷炸裂。右手用無名指、小指及掌部夾住管塞，左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手再輕輕拔開管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上，刮取少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰上方。日常試驗(yàn)用菌液 取上述濃溶液，用滅菌水1:3稀釋至滅菌試管中，冷藏箱保存?zhèn)溆谩?啤酒酵母菌[Saccharomyces cerevisiae9736]懸液 取啤酒酵母菌的V號(hào)培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)物，用接種環(huán)取菌苔少許接種于Ⅳ號(hào)培養(yǎng)基斜面上，在32～35℃培養(yǎng)24小時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，放至含有滅菌玻璃珠的試管中，振搖均勻，以當(dāng)日使用為宜。C P式中W為需稱取標(biāo)準(zhǔn)品或供試品的重量（mg）；V為溶解標(biāo)準(zhǔn)品或供試品制成濃溶液時(shí)用容量瓶的體積（ml）；C為標(biāo)準(zhǔn)品或供試品濃溶液的濃度（u/ml或181。 標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液應(yīng)使用同一緩沖液（溶劑）稀釋，以避免因pH或濃度不同而影響測(cè)定結(jié)果。芽孢可至60℃）的培養(yǎng)基內(nèi)，搖勻，作為菌層培養(yǎng)基用。（）法，在雙碟的4個(gè)鋼管中分別成“Z”字形滴加標(biāo)準(zhǔn)品（S）及供試品（T）高（H）、低（L）兩種濃度的溶液，即滴加溶液的順序?yàn)镾H－TH－TL－SL；（）法的6個(gè)鋼管中間隔3個(gè)鋼管中分別滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品高（H）、中（M）、低（L）3種濃度溶液，并使相同濃度成對(duì)角，滴加順序?yàn)镾H－TH－SM－TM－SL－TL。7 記錄與計(jì)算 記錄 試驗(yàn)記錄應(yīng)包括抗生素藥品名稱、規(guī)格、批號(hào)、生產(chǎn)廠、檢查編號(hào)、檢查依據(jù)、檢驗(yàn)日期、溫度、相對(duì)濕度、標(biāo)準(zhǔn)品名稱、標(biāo)準(zhǔn)品批號(hào)、標(biāo)準(zhǔn)品來源及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)示含量、試驗(yàn)菌名稱及菌懸液濃度、培養(yǎng)基名稱、來源及批號(hào)、緩沖液名稱及pH、供試品估計(jì)效價(jià)、抑菌圈測(cè)量?jī)x型號(hào)及編號(hào)、標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的稱量、稀釋步驟、試驗(yàn)人與校核人、抑菌圈測(cè)量及數(shù)據(jù)處理結(jié)果?？煽啃詼y(cè)驗(yàn)即通過對(duì)劑間變異的分析，以測(cè)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的對(duì)數(shù)劑量與反應(yīng)的關(guān)系是否顯著偏離平行直線。 原料藥效價(jià)測(cè)定一般需做雙份樣品平行試驗(yàn)，以使核對(duì)。原料藥一般皆以干燥品或無水物折算效價(jià)，須先測(cè)其含水或未折干效價(jià)，再根據(jù)供試品的水分或干燥失重測(cè)定結(jié)果折算成無水物或干燥品的效價(jià)。再量取適量稀釋至規(guī)定濃度。測(cè)得效價(jià)后，再根據(jù)裝量差異項(xiàng)下的平均裝量，計(jì)算出平均每袋（包）的效價(jià)，根據(jù)標(biāo)示量即可算出含量。 恒溫水浴箱 工作體積600mm300mmmm150mm（長(zhǎng)寬高）。使用前滅菌。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。含試驗(yàn)菌液體培養(yǎng)基在配制后應(yīng)立即使用，必要時(shí)可適當(dāng)冷卻，以防止試驗(yàn)菌在培養(yǎng)前生長(zhǎng)。各濃度不少于4個(gè)試管。X、Y應(yīng)具有直線回歸關(guān)系。（）法，除符合（）法的要求外，二次曲線、反向二次曲線P。