臨床pcr檢驗標(biāo)本的采集、處理、保存及核酸提取方法-展示頁
2025-07-27 04:49本頁面
【正文】 使用肝素。 ? RNA測定，標(biāo)本的獲取和保存方式對測定結(jié)果，可能有決定性影響。 ? 實驗室應(yīng)根據(jù)待測靶核酸的特性，對各種臨床樣本的運(yùn)送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。 ? 2022年，這位專家又進(jìn)行了類似的統(tǒng)計，結(jié)果顯示，檢驗前期的誤差發(fā)生率仍高達(dá) % 正確采集、運(yùn)送、保存臨床標(biāo)本 的重要性 ? 質(zhì)量保證關(guān)鍵性環(huán)節(jié) ? 解決涉及實驗室檢驗的醫(yī)患糾紛的方法之一 核酸提取的重要性 ? 核酸提取是臨床 PCR檢驗最為關(guān)鍵的部分 ? 核酸提取的成敗關(guān)系到臨床 PCR檢驗的正確與否 ? 臨床 PCR檢驗操作中最易出問題的環(huán)節(jié) 標(biāo)本采集 ? 標(biāo)本采集時間對擴(kuò)增檢測結(jié)果的影響 （過早或過晚都可能會出現(xiàn)假陰性結(jié)果） ? 標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備 （適度消毒） ? 標(biāo)本的類型和采集量 （衣原體 上皮細(xì)胞） ? 采樣質(zhì)量的評價 （評價方法：肉眼觀察、顯微鏡下觀察和化學(xué)分析） ? 采樣及運(yùn)輸容器 （一次性無菌器材 ,防腐劑 ,抗凝劑） ? 標(biāo)本采集中的防污染 （一次性無菌容器 ， 防止混入操作者頭發(fā)，表皮等，如玻璃容器要高壓滅菌） 標(biāo)本運(yùn)送 ? 樣本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至檢測實驗室。臨床 PCR檢驗標(biāo)本的采集、處理、保存及核酸提取方法 江西省腫瘤醫(yī)院 陳文學(xué) 檢驗誤差的發(fā)生率 ? 1997年，一位意大利著名檢驗專家對急診檢驗誤差發(fā)生的種類和發(fā)生率進(jìn)行了統(tǒng)計。結(jié)果顯示，約有 %的檢驗誤差發(fā)生在檢驗前期，而來自檢驗中期和檢驗后期的誤差率分別為%和 %。 ? 樣本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑 ,如用于 RNA測定加入 GITC的血清 (漿 )樣本和用于 DNA測定的 EDTA抗凝血等 ,則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。 臨床標(biāo)本的處理和保存 ? 血清（漿） ? 全血 ? 外周血單個核細(xì)胞 ? 痰 ? 棉拭子 ? 膿液 ? 體液 ? 乳汁 ? 組織 血清（漿） ? DNA測定，可按照一般的血清標(biāo)本處理程序，對測定影響不大。最好是使用EDTA抗凝 (嚴(yán)禁使用肝素，因其對 PCR擴(kuò)增有抑制，且很難在核酸提取過程中完全去除 )全血標(biāo)本，抗凝后 6小時內(nèi)分離血漿，如使用血清標(biāo)本，則需盡快 (2小時內(nèi) )分離血清，標(biāo)本的短期（ 1～ 2周）保存可在 20℃ 下，較長期保存應(yīng)在 70℃ 下。 ? 全血樣本如用于 DNA提取檢測 ,可 4℃ 下短期保存 ,如用于 RNA檢測，則應(yīng)在取血后，盡快提取 RNA 。 ? 外周血單個核細(xì)胞如暫不提取核酸 ,可保存于 70℃ 下 . 痰 ? 痰屬于分泌物 ,臨床上常用作為結(jié)核桿菌 DNA測定標(biāo)本 。 ? 如用于非結(jié)核桿菌如肺炎支原體的 PCR檢測 ， 痰標(biāo)本只能室溫懸浮于生理鹽水中 ， 充分振蕩混勻 ，促使大塊粘狀物下沉 ， 取上清離心 ， 所得到的沉淀物即可用于核酸提取 。 痰標(biāo)本處理的基本模式 ? 通用模式 ? 簡單模式 痰標(biāo)本處理通用模式 （ 1）通用標(biāo)本處理（ Universal sample processing, USP）溶液： 46 mol/L鹽酸胍（ GuHCl） 50 mmol/L TrisHCl, 25 mmol/L EDTA %十二烷基肌酸鈉 （ Sarkosyl ） ~ mol/L β巰基乙醇。 （ 3） 10%Chelex100( 含 % Triton X100和 % Tween 20) 一定體積的痰 USP溶液 ,震蕩 3040s 1015ml蒸餾水，室溫放置 510min 5000g室溫離心 1015min，棄上清 500ul無菌 %Tween80溶解或重懸 20220g室溫離心 1015min，棄上清 加入 5倍 10%chelex100，混勻， 90℃
外語相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1