免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-展示頁(yè)
2025-07-03 16:50本頁(yè)面
【正文】 ，在蛋白質(zhì)膠體溶液中加入一定量的（NH4）2SO4或Na2SO4鹽類(lèi)，使溶液中大部分自由水分子轉(zhuǎn)變?yōu)殡x子水化分子，降低蛋白質(zhì)極性基團(tuán)與水分子的相互作用，破壞蛋白質(zhì)水膜，蛋白質(zhì)溶解度也隨之降低。不同濃度的硫酸銨鹽析蛋白成分不同，利用這一原理提取所需的免疫球蛋白成分。但大多數(shù)采用二步法以上相結(jié)合的方法，特別是以硫酸銨提純?yōu)榛A(chǔ)，再經(jīng)過(guò)透析或?qū)游鲋姆椒▉?lái)提高免疫球蛋白及其各成分的純度最為常用。 實(shí)驗(yàn)一 免疫球蛋白的粗提（鹽析法）一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)免疫球蛋白的粗提方法 實(shí)踐IgG分離純化過(guò)程 了解分離純化抗體的原理二、 實(shí)驗(yàn)原理隨著免疫學(xué)的發(fā)展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，常用鹽析法、凝膠柱層析、離子交換劑層析以及免疫親和層析等技術(shù)對(duì)血清抗體進(jìn)行分離純化。硫酸銨溶液能使蛋白質(zhì)膠體脫水并中和其電荷而使之沉淀下來(lái)（稱(chēng)為鹽析）。鹽析只能粗提，為了獲得純化的免疫球蛋白成分，必須進(jìn)一步采用層析的方法進(jìn)行分離。蛋白質(zhì)由于分子質(zhì)量和攜帶的電荷不同，可在不同濃度的高鹽溶液內(nèi)分級(jí)析出。二、實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制 1．人全血清（購(gòu)買(mǎi)商品）2．硫酸銨飽和溶液硫酸銨 800g~850gH2O 1 000ml加熱至絕大部分溶質(zhì)溶解為止，趁熱過(guò)濾，置室溫過(guò)夜，然后以28％（不調(diào)pH值也可以）。如次品必須除去重金屬，可在溶液中通入H2S，靜置過(guò)夜后濾過(guò)，加熱蒸發(fā)H2S即可。2H2O 加H2O至 1 000ml B液： Na2HPO44． Mol/ Mol/L的NaOH液三、實(shí)驗(yàn)步驟取免疫血清 ，加 生理鹽水/PBS逐滴加入飽和（NH4）2SO4 mL（此時(shí)為50%飽和度），4℃，靜置 20 min，3000 r/min 離心 20 min棄上清，取沉淀溶于 1 mL 生理鹽水/PBS中 逐滴加入飽和（NH4）2SO4 mL（此時(shí)為33%飽和度），4℃，靜置 20
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