【正文】
修飾。College of Life Sciences? 選擇修飾劑時要考慮幾點(diǎn):? ① 修飾劑的相對分子質(zhì)量、修飾劑鏈的長度對蛋白質(zhì)的吸附性;? ② 修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的數(shù)目及位置;? ③ 修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的活化方法與條件。? 1.選擇酶分子修飾劑? 理想的修飾劑是選擇性高、在溫和反應(yīng)條件下能進(jìn)行修飾反應(yīng)、被修飾的功能基在溫和條件下能再生。College of Life Sciences? 通過各種方法使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變,從而改變酶的某些特性和功能的技術(shù)過程稱為酶分子修飾。? 包括物理修飾、化學(xué)修飾,分子改造等College of Life Sciences? 一、酶修飾的作用? 1. 穩(wěn)定酶的天然構(gòu)象與增強(qiáng)耐熱性? 2.保護(hù)酶活性部位與抗抑制劑? 3. 維持酶功能結(jié)構(gòu)的完整性與抗蛋白水解酶? 4. 降低酶的抗原性及穩(wěn)定酶的微環(huán)境? 5. 改變酶學(xué)性質(zhì)College of Life Sciences? 二、酶修飾的方法? 化學(xué)修飾? 酶改造的分子生物途徑? 酶分子的物理修飾College of Life Sciences? 一、酶分子化學(xué)修飾的一般問題? 酶分子的化學(xué)修飾對酶結(jié)構(gòu)與功能、酶的催化機(jī)制等酶學(xué)研究方面有著重要作用,而在酶工程中所運(yùn)用的修飾方法與基礎(chǔ)研究的要求有所不同。College of Life Sciences? ① 能選擇性地與一個氨基酸殘基反應(yīng);? ② 反應(yīng)在保證酶蛋白不變性的條件下進(jìn)行;? ③ 被標(biāo)記的殘基在酶中穩(wěn)定,容易通過降解分離出來并鑒定;? ④ 反應(yīng)程度能用簡單的技術(shù)測定。College of Life Sciences? 2.選擇反應(yīng)條件? ① 反應(yīng)體系中酶與修飾劑的分子比例;? ② 反應(yīng)體系的溶劑性質(zhì)、鹽濃度和 pH條件;? ③ 反應(yīng)溫度及時間。? 5.分離? 需要通過不同的方法進(jìn)行分離,將具有不同修飾度的酶分子分開,從中獲得具有較好修飾效果的修飾酶。? 金屬離子置換修飾的方法:酶的純化、去除原有的金屬離子、加入置換離子? 金屬離子置換修飾的作用:十一次課College of Life Sciences? 三、酶分子側(cè)鏈基團(tuán)修飾? 功能基團(tuán)主要有氨基、羧基、巰基.咪唑基、吲哚基、酚羥基、羥基、胍基、甲硫基? 酶側(cè)鏈基團(tuán)的修飾方法很多,主要有氨基修飾、羧基修飾、巰基修飾、酚基修飾、胍基修飾、咪唑基修飾、吲哚基修飾及分子內(nèi)交聯(lián)修飾等College of Life Sciences 各種氨基酸側(cè)鏈的修飾劑氨基酸 側(cè)鏈基團(tuán) 修飾劑Lys 氨基 三硝基苯磺酸, 2, 4-二硝基氟苯、碘乙酸、碘乙酰胺、丹磺酰氯、亞硝酸Asp、 Glu 羧基 水溶性碳化二亞胺Arg 胍基 苯乙二醛, 1,2-環(huán)己二酮、丁二酮Cys 巰基 碘乙酸、碘乙酰胺、 N乙基馬來酰亞胺二硫鍵 巰基乙醇、 DTTHis 咪唑基 焦碳酸二乙酯、碘乙酸Tyr 酚羥基 碘、四硝基甲烷Trp 吲哚基 N溴代琥珀酰亞胺College of Life Sciences? 四、大分子結(jié)合修飾? 利用水溶性大分子與酶結(jié)合,使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某