原生質(zhì)體融合ppt課件-展示頁(yè)
2025-05-21 06:56本頁(yè)面
【正文】 稀 釋 洗 滌培 養(yǎng)選 擇? 鹽類(lèi)融合劑種類(lèi) – 硝酸鹽類(lèi)： NaNO KNO Ca(NO3)2 – 氯化物類(lèi)： NaCl、 CaCl2 、 MgCl2 、 BaCl2 – 葡聚糖硫酸鹽類(lèi)：葡聚糖硫酸鉀、葡聚糖硫酸鈉 ? 鹽類(lèi)融合的優(yōu)缺點(diǎn) – 優(yōu)點(diǎn)：鹽類(lèi)融合劑對(duì)原生質(zhì)體的活力破壞力小 – 缺點(diǎn)：融合頻率低，對(duì)液泡化發(fā)達(dá)的原生質(zhì)體不易誘發(fā)融合 （ 3）鹽類(lèi)融合法 （ 4）高 Ca2+和高 pH值融合 ? Ca2+濃度 mol/L ? pH 取分離、純化好的兩種親本原生質(zhì)體以 1:1的比例混合 。 當(dāng) PEG分子被洗脫后，膜上的電荷便重新分布，從而導(dǎo)致原生質(zhì)體融合。 融合過(guò)程： （ 2）聚二乙醇 誘導(dǎo)融合法 ◆ PEG融合的機(jī)理： PEG分子具有輕微的負(fù)極性，與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成氫鍵。 實(shí)際操作：先把待融合的細(xì)胞或原生質(zhì)體混合，取樣置于 100V/cm的高頻交流電場(chǎng)中，在非均勻交流電場(chǎng)中形成項(xiàng)鏈狀排列； 完整煙草原生質(zhì)體 （ 40 ） 原生質(zhì)體成串 （ 40 ） 微電極法： 再用 1~5V/cm直流電脈沖 /微秒沖擊細(xì)胞或原生質(zhì)體的粘接點(diǎn)，細(xì)胞膜降解造成若干微孔，于是在膜之間形成通道，使細(xì)胞質(zhì)得以交換；最后導(dǎo)致新的球狀細(xì)胞的形成。 ◆ 電融合特點(diǎn)： 效率高 對(duì)原生質(zhì)體傷害性小 對(duì)融合細(xì)胞數(shù)易于控制 方法： 微電極法和雙向電泳法 雙向電泳法： 通過(guò)電泳，兩細(xì)胞膜緊密接觸，且膜表面的蛋白質(zhì)分子分離，產(chǎn)生了無(wú)蛋白的類(lèi)脂區(qū)。 ◆ 使植物無(wú)性雜交成為可能 ◆使有性雜交根本無(wú)法獲得的種間、屬間、科間遠(yuǎn)緣雜種成為現(xiàn)實(shí) ◆打破了物種間的界限 原生質(zhì)體融合的意義 植物體細(xì)胞雜交的幾個(gè)重要進(jìn)展 1960年 Kocking用酶法制備高等植物原生質(zhì)體首次獲得成功； 1971年 Takebe首次從離體煙草原生質(zhì)體培養(yǎng)中獲得再生完整植株； 1972年 Carlson首次獲得粉藍(lán)煙草和郎氏煙草的細(xì)胞雜種，這是第一個(gè)植物體細(xì)胞雜種； 1974年 Kao將聚乙二醇（ PEG）誘導(dǎo)融合法應(yīng)用于植物細(xì)胞融合并建立了相應(yīng)的融合技術(shù)； 1978年 Melchers獲得第一個(gè)屬間體細(xì)胞雜種（番茄＋馬鈴薯）； 1981年 Zimmerman發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念； 1987年 Schweiger建立了單對(duì)原生質(zhì)體電融合技術(shù)程序。一、原生質(zhì)體分離 二、原生質(zhì)體分離及純化操作 三、原生質(zhì)體培養(yǎng) 四、體細(xì)胞雜交（原生質(zhì)體融合） 五、原生質(zhì)體的遺傳飾變 第
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