原生質(zhì)體融合ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 06:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 – 優(yōu)點(diǎn)：鹽類融合劑對(duì)原生質(zhì)體的活力破壞力小 – 缺點(diǎn)：融合頻率低，對(duì)液泡化發(fā)達(dá)的原生質(zhì)體不易誘發(fā)融合 （ 3）鹽類融合法 （ 4）高 Ca2+和高 pH值融合 ? Ca2+濃度 mol/L ? pH 取分離、純化好的兩種親本原生質(zhì)體以 1:1的比例混合 。 加入 。 再用甘氨酸鈉緩沖調(diào)節(jié) pH值到 ，成為融合液，同時(shí)在 37℃ 下保溫 。 用 ； 兩種原生質(zhì)體的融合率達(dá)到 10%。 （ 5）生物誘導(dǎo)融合法 —— 仙臺(tái)病毒法 仙臺(tái)病毒是一類被膜病毒，屬于附黏液病毒族，它是多形性顆粒，直徑為 50～ 60 nm，由兩層磷脂組成的外膜包裹著 RNA和蛋白質(zhì)復(fù)合體，外膜上有兩種糖蛋白，一種是HANA蛋白質(zhì)，一種是 F蛋白質(zhì)，前者具有神經(jīng)氨酸酶和血凝活性（分子量較大），后者具有融合和溶血作用（分子量較小）。 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的機(jī)理： 病毒被膜上的兩種糖蛋白可和細(xì)胞膜表面的糖蛋白發(fā)生相互作用，從而使兩個(gè)細(xì)胞可以互相接觸，在電鏡下觀察到在相接觸的相鄰細(xì)胞表面之間將產(chǎn)生一些微小的細(xì)胞質(zhì)橋。隨著時(shí)間的推移，細(xì)胞質(zhì)橋數(shù)量和橋的體積也在增加，最后相鄰細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)就結(jié)合在一起了，形成細(xì)胞凝集塊再通過膜上蛋白質(zhì)分子的重新排列，使膜中脂類分子重排而打開質(zhì)膜，最后導(dǎo)致細(xì)胞融合。 利用仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的步驟： （ 1）先將親本細(xì)胞（待融合的細(xì)胞）分別制成懸浮液、 混合離心； （ 2）將沉積細(xì)胞懸于滅活的仙臺(tái)病毒懸液里，在 4oC低溫下?lián)u動(dòng) 20分鐘，使細(xì)胞形成凝集塊； （ 3）再將溫度升至 37oC，間歇搖動(dòng) 30分鐘，使其融合； （ 4）洗去病毒，將融合細(xì)胞浮于選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 由于 4oC低溫利于細(xì)胞聚集，在融合時(shí)需要提高溫度，否則融合不會(huì)發(fā)生。 根據(jù)融合時(shí)細(xì)胞的完整程度，原生質(zhì)體融合分為兩大類：對(duì)稱融合和非對(duì)稱融合 對(duì)稱融合： 兩個(gè)完整的細(xì)胞原生質(zhì)體的融合 非對(duì)稱融合： 利用物理或化學(xué)的方法使某一親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再進(jìn)行融合。融合的結(jié)果是獲得非對(duì)稱雜種，即兩融合親本對(duì)雜種細(xì)胞的遺傳組成的貢獻(xiàn)是不對(duì)等的。 3 雜種細(xì)胞的選擇 ? 互補(bǔ)選擇： ? 雙熒光標(biāo)記選擇法： ? 機(jī)械選擇法： 互補(bǔ)選擇： 利用兩個(gè)親本具有不同遺傳和生理特性，在特定培養(yǎng)條件下，只有發(fā)生互補(bǔ)作用的雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)的選擇方法。 互補(bǔ)選擇方法： A、白化互補(bǔ)選擇法 B、營(yíng)養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)選擇 C、抗性互補(bǔ)選擇 D
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