原生質(zhì)體融合ppt課件-wenkub
2023-05-27 06:56:02 本頁(yè)面
【正文】 電脈沖 物理方法 生物方法 仙臺(tái)病毒 (Sendai virus) NaNO3處理 高 pH高濃度 Ga2+ 飛秒激光誘導(dǎo)融合 電融合 空間細(xì)胞融合 （ 1） 電融合法： 指利用改變電場(chǎng)誘導(dǎo)原生質(zhì)體彼此相連成串，再施以瞬間強(qiáng)脈沖電壓促使質(zhì)膜發(fā)生可逆性電擊穿，達(dá)到原生質(zhì)體融合的方法。一、原生質(zhì)體分離 二、原生質(zhì)體分離及純化操作 三、原生質(zhì)體培養(yǎng) 四、體細(xì)胞雜交（原生質(zhì)體融合） 五、原生質(zhì)體的遺傳飾變 第三節(jié)、植物原生質(zhì)體技術(shù)及應(yīng)用 體細(xì)胞雜交研究歷程及一般概念 體細(xì)胞雜交的一般流程 雜交細(xì)胞的鑒定 1 2 3 細(xì)胞雜交的應(yīng)用 4 （一）體細(xì)胞雜交的含義及研究歷程 概念： 不同親本（種間或?qū)匍g等）的原生質(zhì)體，在人工誘導(dǎo)下，相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合、核融合并形成雜種細(xì)胞，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)進(jìn)一步發(fā)育成雜種植株。 ◆ 電融合特點(diǎn)： 效率高 對(duì)原生質(zhì)體傷害性小 對(duì)融合細(xì)胞數(shù)易于控制 方法： 微電極法和雙向電泳法 雙向電泳法： 通過(guò)電泳，兩細(xì)胞膜緊密接觸，且膜表面的蛋白質(zhì)分子分離，產(chǎn)生了無(wú)蛋白的類脂區(qū)。 融合過(guò)程： （ 2）聚二乙醇 誘導(dǎo)融合法 ◆ PEG融合的機(jī)理： PEG分子具有輕微的負(fù)極性，與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成氫鍵。 優(yōu)點(diǎn)： 成本低、不需要特殊的設(shè)備；融合子產(chǎn)生的異核率高；融合過(guò)程不受物種限制 缺點(diǎn)： 融合過(guò)程繁瑣、 PEG可能對(duì)細(xì)胞造成毒害 PEG融合所需試劑 ? 融合液： pH CaCl2 2H2O 8~10mmol KH2PO4 甘露醇或山梨醇 ~ ? 誘導(dǎo)液： 融合液＋ PEG 20～ 45％ ? 稀釋液： A液（ g/100ml） B液 (g/100ml) 葡萄糖 甘氨酸 CaCl2 2H2O NaOH P1 P2 P1 P2 混合靜止 1 min. 融 合 融合液 加入 PEG 稀 釋 洗 滌 加入稀釋液 加入培養(yǎng)基 培 養(yǎng) 選 擇 PEG法的流程 融 合稀 釋 洗 滌培 養(yǎng)選 擇? 鹽類融合劑種類 – 硝酸鹽類： NaNO KNO Ca(NO3)2 – 氯化物類： NaCl、 CaCl2 、 MgCl2 、 BaCl2 – 葡聚糖硫酸鹽類：葡聚糖硫酸鉀、葡聚糖硫酸鈉
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