guan細胞融合ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 18:05 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 原理： PEG帶有大量的負電荷 ,和 細胞膜 表面的負電荷在 Ca2＋ 的連接下，形成靜電鍵，促使異源的 細胞膜 間的粘著和結(jié)合，在高 pH,高 Ca2＋溶液的作用下，將 Ca2＋ 和與質(zhì)膜結(jié)合的 PEG分子洗脫，導(dǎo)致電荷平衡失調(diào)并重新分配，使兩種 細胞膜 上的正負電荷連接起來，進而形成具有共同質(zhì)膜的融合體。 注意事項 ? 1 PEG融合的關(guān)鍵是作用時間 ? 2 PEG規(guī)格和純度與融合效率有關(guān) ? 3 融合與細胞密度有關(guān) ? 4 融合液中加入少量 CaCl2，即維持一定電導(dǎo)率，對細胞也有保護作用 （ Electroporation） 3 注意事項 ? 1）對介質(zhì)要求高，一般用高純度的蒸餾水并選用適當(dāng)?shù)姆请娊橘|(zhì)溶液，如甘露醇等配制等滲性介質(zhì)。 ? 2）注意控制高頻交流電壓和直流脈沖電壓的強度和時間，以防止細胞連接成串或發(fā)生可逆性降解。 融合參數(shù)：主要包括交流電壓、交變電場的振幅頻率、交變電場的處理時間；直流高頻電壓、脈沖寬度、脈沖次數(shù)等。 優(yōu)點： ?融合率高，達 70％－ 80％，甚至 100％ 融合率＝（融合組多核細胞的核數(shù)－對照組多核細胞的核數(shù) /對照組的全部細胞數(shù)） 100％ ?可在顯微鏡下定向誘導(dǎo)細胞融合 ?可直接挑選雜種細胞 ? 原理： 兩種親本細胞融合的混合物中可能有多種類型細胞，篩選的目的是獲得優(yōu)良的雜種細胞 。 ? 1）親本 ? 2）同核體 homokaryon ：同源細胞融合體，它們的基因型和表現(xiàn)型完全一樣。 ? 3）異核體 heterokaryon ：異源細胞的融合體，它們含有雙親細胞核和細胞質(zhì)物質(zhì)。 ? 4）多核體：含有雙親不同比例核物質(zhì)的融合體 ? 5）異胞質(zhì)體：具有不同胞質(zhì)來源的雜合細胞。 ? 6）核質(zhì)體：有細胞核而帶有少量細胞質(zhì)的亞原生質(zhì)體 第二節(jié) 融合細胞的篩選 動物細胞融合的篩選方式： ? 1） 利用抗藥性篩選系統(tǒng) ：利用生物細胞對藥物敏感性差異篩選雜種細胞。 ? 親本 A：對氨芐青霉素敏感，對卡那霉素不敏感 ? 親本 B：對卡那霉素敏感，對氨芐青霉素不敏感 ? 雜種細胞可以在含有兩種抗生素的培養(yǎng)基上生長 ? 2） 營養(yǎng)互補篩選系統(tǒng)： 細胞在缺乏
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1