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正文內(nèi)容

水產(chǎn)動物育種學(xué)第七章細(xì)胞融合與核移植(編輯修改稿)

2025-06-09 02:34 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 17 克隆羊 Dolly 一、魚類細(xì)胞核移植 我國在魚類細(xì)胞核移植方面做出了突出的貢獻(xiàn)。 1963年 童第周 首次將核移植技術(shù)應(yīng)用于硬骨魚類,將金魚和鳑鲏 囊胚細(xì)胞核移入同種去核未受精卵,獲得正常的胚胎和幼苗。此后 40年里,魚類核移植的研究主要集中在我國 ,學(xué)者們在種、屬、亞科、科、目間甚至綱間進(jìn)行了廣泛的細(xì)胞核移植研究。 (P162表 71, 72) 1980年,童第周院士(右)成功培育出具有“發(fā)育全能性”的克隆魚; 1981年又用成年鯽魚的腎臟細(xì)胞獲得克隆魚,這比成年體細(xì)胞克隆羊多利早了 15年。 童第周院士于 1957年~ 1962年間任中國科學(xué)院動物研究所所長。 ? 以魚類囊胚細(xì)胞為核供體的研究中,先后獲得鯉鯽、鯽鯉、草團(tuán)、羅非鯉、羅非金等核移植魚。 ? 親緣關(guān)系近的魚類較容易獲得成魚,目以上的核移植雜交僅獲得早期的胚胎。 ? 以體細(xì)胞為核供體的研究中,將鯉魚紅細(xì)胞核移植入金魚卵,獲得幼魚;草魚尾鰭細(xì)胞核用于核移植,獲得胚胎;腎臟、肝臟細(xì)胞用于核移植得到鯽魚和金魚的胚胎。 移核魚 F2 二、魚類核移植方法 ? ? ? ? ? 提供細(xì)胞核為供體--通常為魚類的 囊胚細(xì)胞 或體細(xì)胞。去核的卵子為受體--用魚類 成熟的卵細(xì)胞 。一般可采用人工催產(chǎn)的方法得到。 ?卵子在接受供體核前,先要被激活以獲得發(fā)育能力。魚卵擠入水中即被激活。 ?兩者在發(fā)育時(shí)間上要配合好,要求受體成熟卵剛產(chǎn)出時(shí),供體受精卵正好發(fā)育至囊胚期,否則無法進(jìn)行核移植。 ?供體與受體配合的辦法:可以用超低溫保存供體囊胚細(xì)胞;用溫度控制供體受精卵的發(fā)育速度。 22 ?受精后已發(fā)育到高囊胚或低囊胚的魚卵去膜后,置于底部涂有瓊脂,并盛有 Holtfreter氏液的培育皿中,置于解剖顯微鏡下,用玻璃針 \發(fā)圈切下位于動物性極的囊胚細(xì)胞團(tuán),這些細(xì)胞在 2- 3分鐘內(nèi)能分散成游離細(xì)胞。 ?如果細(xì)胞暫時(shí)分不開,可用一支細(xì)吸管吸水后輕輕沖擊它們,以幫助細(xì)胞分離。 郝氏液的配方 NaCl KCl CaCl2 NaHCO3 雙蒸水 100ml pH ? ? 移核前,魚卵需先去膜。最常用的方法是用磨尖的不銹鋼鑷子在解剖鏡下剝開卵膜,游離出卵子。 ? 剝膜應(yīng)于排卵后 2- 3分鐘,在盛有消毒水的培育皿中進(jìn)行。 ? 剝粘性卵時(shí),一般只需一手持鑷,用鑷尖夾住卵膜的一處,迅速把膜撕裂,裂口越大越好; ? 剝浮性卵時(shí)
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