水產(chǎn)動物育種學(xué)第七章細(xì)胞融合與核移植(編輯修改稿)
2025-06-09 02:34 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 17 克隆羊 Dolly 一、魚類細(xì)胞核移植 我國在魚類細(xì)胞核移植方面做出了突出的貢獻(xiàn)。 1963年 童第周 首次將核移植技術(shù)應(yīng)用于硬骨魚類，將金魚和鳑鲏 囊胚細(xì)胞核移入同種去核未受精卵，獲得正常的胚胎和幼苗。此后 40年里，魚類核移植的研究主要集中在我國 ，學(xué)者們在種、屬、亞科、科、目間甚至綱間進(jìn)行了廣泛的細(xì)胞核移植研究。 （P162表 71， 72） 1980年，童第周院士（右）成功培育出具有“發(fā)育全能性”的克隆魚； 1981年又用成年鯽魚的腎臟細(xì)胞獲得克隆魚，這比成年體細(xì)胞克隆羊多利早了 15年。 童第周院士于 1957年～ 1962年間任中國科學(xué)院動物研究所所長。 ? 以魚類囊胚細(xì)胞為核供體的研究中，先后獲得鯉鯽、鯽鯉、草團(tuán)、羅非鯉、羅非金等核移植魚。 ? 親緣關(guān)系近的魚類較容易獲得成魚，目以上的核移植雜交僅獲得早期的胚胎。 ? 以體細(xì)胞為核供體的研究中，將鯉魚紅細(xì)胞核移植入金魚卵，獲得幼魚；草魚尾鰭細(xì)胞核用于核移植，獲得胚胎；腎臟、肝臟細(xì)胞用于核移植得到鯽魚和金魚的胚胎。 移核魚 F2 二、魚類核移植方法 ? ? ? ? ? 提供細(xì)胞核為供體－－通常為魚類的 囊胚細(xì)胞 或體細(xì)胞。去核的卵子為受體－－用魚類 成熟的卵細(xì)胞 。一般可采用人工催產(chǎn)的方法得到。 ?卵子在接受供體核前，先要被激活以獲得發(fā)育能力。魚卵擠入水中即被激活。 ?兩者在發(fā)育時(shí)間上要配合好，要求受體成熟卵剛產(chǎn)出時(shí)，供體受精卵正好發(fā)育至囊胚期，否則無法進(jìn)行核移植。 ?供體與受體配合的辦法：可以用超低溫保存供體囊胚細(xì)胞；用溫度控制供體受精卵的發(fā)育速度。 22 ?受精后已發(fā)育到高囊胚或低囊胚的魚卵去膜后，置于底部涂有瓊脂，并盛有 Holtfreter氏液的培育皿中，置于解剖顯微鏡下，用玻璃針 \發(fā)圈切下位于動物性極的囊胚細(xì)胞團(tuán)，這些細(xì)胞在 2－ 3分鐘內(nèi)能分散成游離細(xì)胞。 ?如果細(xì)胞暫時(shí)分不開，可用一支細(xì)吸管吸水后輕輕沖擊它們，以幫助細(xì)胞分離。 郝氏液的配方 NaCl KCl CaCl2 NaHCO3 雙蒸水 100ml pH ? ? 移核前，魚卵需先去膜。最常用的方法是用磨尖的不銹鋼鑷子在解剖鏡下剝開卵膜，游離出卵子。 ? 剝膜應(yīng)于排卵后 2－ 3分鐘，在盛有消毒水的培育皿中進(jìn)行。 ? 剝粘性卵時(shí)，一般只需一手持鑷，用鑷尖夾住卵膜的一處，迅速把膜撕裂，裂口越大越好； ? 剝浮性卵時(shí)
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