20xx年醫(yī)學(xué)專題—動物細胞融合(編輯修改稿)
2024-11-19 03:55 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 單細胞在軟瓊脂（或者瓊脂糖）培養(yǎng)基上增殖后不能移動，形成集落。待細胞集落長到肉眼可見后，用吸管從瓊脂上挑出來 (一般 810天后 (tiān h242。u))，再移到液體培養(yǎng)基中，進行繁殖。第十七 頁 ，共三十七 頁 。2. 有限稀釋法 將細胞稀釋到 100個 /ml，理論上每 (10μl)含有 (h225。n yǒu)1個細胞。取 (如 96孔板 )的小孔中培養(yǎng)，則可獲得單個細胞形成的集落。1) 取 ml 510 4/ml細胞 +4ml培養(yǎng)基稀釋，得 110 4/ml.2) 取 110 4/ml細胞液 +， 得110 3/ml.3) 取 10 3/ml細胞液 +，得 100 cells/ml.4) 取 100 cells/ml細胞液于培養(yǎng)板小孔，加 ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)后得雜種細胞系。第十八 頁 ，共三十七 頁 。3. 顯微鏡操作法 通過顯微操作分離雜交單細胞、分別單獨培養(yǎng)。4. 蓋片分離法1) 用釘錘 (dīngchu237。)于潔凈的橡膠上砸干凈蓋玻片；2) 選擇碎塊、大小形態(tài)適用碎片；3) 加培養(yǎng)液、進行細胞培養(yǎng)；4) 倒置鏡下選細胞，挑出單細胞玻片；5) 進行單個細胞培養(yǎng)。第十九 頁 ，共三十七 頁 。5. 熒光激活分離法 用一種熒光激活細胞分類器（ Fluorescence Activated Cell Sorter， FACS）分離雜交細胞。 原理：將細胞經(jīng)熒光抗體染色后，經(jīng)噴嘴形成單個細胞的線形液滴，在激發(fā) (jīfā)光的激發(fā) (jīfā)下，熒光素發(fā)射熒光，此信號由光電倍增管接收，再結(jié)合細胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號，經(jīng)電腦處理，產(chǎn)生信號并與預(yù)定的信號對比，根據(jù)細胞熒光強度及細胞大小不同，將細胞分成不同級別，在電場中發(fā)生偏離，而分別收集于不同容器中。第二十 頁 ，共三十七 頁 。第五節(jié) 細胞融合技術(shù) (j236。sh249。)的應(yīng)用 動物體受抗原刺激后可產(chǎn)生 抗體 ，抑制抗原的作用；增加身體的 抗體 就可以提高機體的抗病能力。 抗體具有特異性，其特異性取決于抗原分子的決定簇。 抗原決定簇： 存在于抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)(hu224。xu233。)基團，一般由 5～ 8個氨基酸或單糖或核苷酸殘基組成。一、 B淋巴細胞雜交瘤生產(chǎn) (shēngchǎn)單克隆抗體第二十一 頁 ，共三十七 頁 。 各種抗原分子具有很多 抗原決定簇 ，不同抗原的決定簇數(shù)目不同，如白喉類毒素有 8個，流感病毒有 40多個?？乖瓫Q定簇大多存在于抗原的表面，但也有隱藏在抗原內(nèi)部。 抗體是由 B淋巴細胞 分化形成的漿細胞合成 (h233。ch233。ng)、分泌的。 每一個 B淋巴細胞在成熟的過程中只產(chǎn)生一種抗體。動物 脾臟 有上百萬種不同的 B淋巴細胞，因此，當(dāng)機體受 抗原 刺激時，每種 B淋巴細胞產(chǎn)生一種抗體（單一抗體），整個動物可以產(chǎn)生眾多不同的抗體（多克隆抗體）。 用免疫動物生產(chǎn)、制備抗體效率低，且多克隆抗體應(yīng)用有很多缺陷，分離這些不同的抗體極為困難。第二十二 頁 ，共三十七 頁 。 選出一個合成一種專一 (zhuānyī)抗體的細胞進行培養(yǎng)，就可得到由單細胞經(jīng)增殖而形成的細胞群，即 單克隆細胞 。單克隆細胞合成針對一種抗原決定簇的抗體，稱為 單克隆抗體 。 單克隆抗體具有理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結(jié)合特異性強、質(zhì)量可控等優(yōu)點 ，用途：1．醫(yī)學(xué)診斷試劑 廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫、放射免疫分析、免疫組化
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