細(xì)胞融合ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-29 08:41 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 去除細(xì)胞壁后誘 導(dǎo)原生質(zhì)體融合 細(xì)胞融合的方法 細(xì)胞膜的流動(dòng)性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、 植物細(xì)胞全能性 原理 動(dòng)物細(xì)胞融合 植物體細(xì)胞雜交 比較項(xiàng)目 植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較 (P166) 五、 融合細(xì)胞篩選 因融合的隨機(jī)性而成為細(xì)胞融合的關(guān)鍵而必需的技術(shù) 1 篩選的原因 ? 細(xì)胞融合是一個(gè) 隨機(jī) 的物理過(guò)程，經(jīng)融合后細(xì)胞將以多種形式出現(xiàn)， 需要通過(guò)培養(yǎng)和篩選，除去不需要的細(xì)胞，分離出需要的雜種細(xì)胞，從而解決融合細(xì)胞的選擇問(wèn)題。 ? 問(wèn)題： A與 B融合過(guò)程中，你能預(yù)見有哪些形式的細(xì)胞嗎？ ? AB， AA， BB。 ? AAA， BBB等多聚體。 ? 未融合的 A， B。 2細(xì)胞融合后產(chǎn)生的類型 ? (1)同核型 — 同源原生質(zhì)體的融合體 ? (2)異核型 — 非同源原生質(zhì)體的融合體 ? (3)多核體 — 含有雙親不同比例核物質(zhì)的融合體 3雜種細(xì)胞篩選方法 (P171) 植物細(xì)胞篩選方式 1） 遺傳互補(bǔ)篩選法： 利用每一親本貢獻(xiàn)一個(gè)功能正常等位基因，糾正另一親本的缺陷，令雜種細(xì)胞表現(xiàn)正常。 ? 如親本 1：葉綠體缺陷型 親本 2：光致死型 兩親本在光照下一種死亡，另一種呈白 色，融合細(xì)胞長(zhǎng)成植株呈綠色，并能成長(zhǎng) ? 2） 抗性互補(bǔ)篩選法： 利用親本細(xì)胞原生質(zhì)體對(duì)抗生素、除草劑及其它有毒物質(zhì)抗性差異選擇雜種細(xì)胞。 ? 如： ? 親本 1：對(duì)放線菌素 D抗性，但在 MS培養(yǎng)基上不能超過(guò) 50個(gè)世代 ? 親本 2：對(duì)放線菌素 D很敏感，但能在 MS上生長(zhǎng) ? 雜種細(xì)胞能在含有放線菌素的 MS培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而親本和其它細(xì)胞死亡 3） 利用物理特性篩選法： 根據(jù)親本的原生質(zhì)體大小、顏色、漂浮密度及電泳遷移率、形成的愈傷組織的差異篩選雜種細(xì)胞。 親本 1：用異硫氰酸熒光素染色原生質(zhì)體 親本 2：葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體 在熒光顯微鏡下，親本 1為紅色，親本 2為綠色，雜種細(xì)胞可以區(qū)分 ? 4） 利用生長(zhǎng)特性篩選法： 利用原生質(zhì)體對(duì)培養(yǎng)基成分要求與反應(yīng)的差異選擇雜種細(xì)胞。 ? 例如粉蘭煙草與朗氏煙草細(xì)胞原生質(zhì)體均需外源激素才能生長(zhǎng)，但其融合細(xì)胞可以產(chǎn)生內(nèi)源激素，在培養(yǎng)基上不需加激素。 動(dòng)物細(xì)胞的篩選方式： ? 1） 利用抗藥性篩選系統(tǒng) ：利用生物細(xì)胞對(duì)藥物敏感性差異篩選雜種細(xì)胞。 ? 親本 A：對(duì)氨芐青霉素敏感，對(duì)卡娜霉素不敏感 ? 親本 B：對(duì)卡娜霉素敏感，對(duì)氨芐青霉素不敏感 ? 雜種細(xì)胞可以在含有兩種抗生素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng) ? 2） 營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)篩選系統(tǒng)： 細(xì)胞在缺乏一種或幾種營(yíng)養(yǎng)成分時(shí)，不能生長(zhǎng)繁殖，即營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞。利用兩種親本細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)作用原理可以篩選雜種細(xì)胞。 ? 親本 A：色氨酸缺陷型 ? 親本 B：蘇氨酸缺陷型 ? 雜種細(xì)胞可以在不含色氨酸和蘇氨酸的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，而親本細(xì)胞均會(huì)死亡。 ? 3） 溫度敏感突變型 雜種細(xì)胞的篩選：一般的培養(yǎng)細(xì)胞能在 32度到 40度的范圍內(nèi)生長(zhǎng)，但溫度敏感突變型的細(xì)胞能在高溫或低溫下生長(zhǎng)。由此篩選雜種細(xì)胞。 ? 親本一：具有卡那霉素抗性但只能在 37度左右生長(zhǎng)。 ? 親本二：高溫敏感突變型，但不能抗卡娜霉素。 ? 雜種細(xì)胞能在高溫和含卡娜霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。 六、 細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用 動(dòng)物細(xì)胞融合 單克隆抗體生產(chǎn) 多克隆抗體與單克隆抗體 ? 動(dòng)物脾臟有上百萬(wàn)個(gè) B淋巴細(xì)胞，一個(gè)細(xì)胞就是一個(gè)克隆，它針對(duì)抗原上的 一個(gè)抗原決定族 產(chǎn)生的抗體是 單克隆抗體 。 ? 一種 抗原通常具有多個(gè)不同的抗原決定族 ，因此能刺激多個(gè) B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的單克隆抗體，因此血清中的抗體是針對(duì)不同抗原決定族的 單克隆抗體混合物 ，稱為 多克隆抗體 。 ? 血液得到的只能是混合抗體，但是需要大量的僅針對(duì)某一個(gè)抗原決定族的單克隆抗體，幾乎是不可能的，因此必須采用其他方法。 ? 如果我們能分離得到只分泌某一種特異性抗體的 B淋巴細(xì)胞，不就可以大量生產(chǎn)相關(guān)單抗了嗎？ ? 問(wèn)題：可以實(shí)現(xiàn)嗎？有什么技術(shù)限制嗎？ （ 1）歷史發(fā)現(xiàn) ? 1975年，德國(guó)和英國(guó)劍橋大學(xué)分子生物學(xué)研究室的科萊爾和米爾斯坦，將已適應(yīng)于體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與綿羊紅細(xì)胞免疫小鼠脾細(xì)胞（ B淋巴細(xì)胞）進(jìn)行融合，發(fā)現(xiàn)融合形成的雜交瘤細(xì)胞具有雙親細(xì)胞的特征： 即像骨髓瘤細(xì)胞一樣在體外培養(yǎng)中能夠無(wú)限地快速增殖，又能持續(xù)地分泌特異性抗體 。培養(yǎng)成細(xì)胞系，獲得高度純合的抗體 — 單克隆抗體。
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