20xx年醫(yī)學專題—第五章-細胞融合與體細胞雜交(編輯修改稿)
2024-11-16 00:50 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 中。但是這種有絲分裂只有當兩個核的DNA合成基本同步時才能發(fā)生。,第十七頁，共五十九頁。,五 細胞融合方法(fāngfǎ),1.生物法 病毒誘導細胞融合：研究最早的細胞融合誘導方法。 主要是由于病毒會與宿主細胞膜直接融合，同時進入兩個細胞就會打破(dǎ p242。)兩個細胞膜的隔閡，引發(fā)細胞質(zhì)的交流，進而達到細胞融合的目的。 原因可能是病毒的磷脂外衣與動物細胞膜相似，病毒外殼上的某些糖蛋白有促進細胞融合的功能。,第十八頁，共五十九頁。,仙臺病毒、皰疹病毒、牛痘病毒和副黏液病毒等。 仙臺病毒（HAJ）是兩層磷脂組成的外膜包裹著 RNA與蛋白質(zhì)的復(fù)合體，因其毒力弱，易被滅活 而常采用。 缺點：提前大量培養(yǎng)病毒； 滅活后才能作為(zu242。w233。i)融合劑使用； 操作繁瑣； 滅活不充分的話，病毒還可能感染操作者與親本細胞。 很少使用病毒誘導法進行細胞融合。,第十九頁，共五十九頁。,原理(yu225。nlǐ)與過程,（1）足夠量的病毒顆粒附著在細胞膜上起搭橋作用(zu242。y242。ng)，使細胞聚集在一起。 （2）通過病毒與原生質(zhì)體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透，胞質(zhì)互相融合。粘結(jié)部位質(zhì)膜被破壞，不同細胞間形成通道，細胞質(zhì)流通并融合（病毒也隨之進入細胞質(zhì)）。 （3）有絲分裂，細胞核融合，形成雜種細胞。,第二十頁，共五十九頁。,化學法,可以采用的化學誘導劑包括(bāoku242。)： NaNO高pH的高濃度Ca2+離子、聚乙二醇（PEG）、溶菌酶、明膠、抗體、植物凝血素伴刀豆球蛋白A等。 細胞膜電荷平衡被打破。,第二十一頁，共五十九頁。,（1）NaNO3誘導(y242。udǎo)融合,1909年，凱斯特（Kuster）發(fā)現(xiàn)機械分離的發(fā)生了質(zhì)壁分離的洋蔥表皮細胞原生質(zhì)體在NaNO3溶液中可以恢復(fù)并伴隨著細胞融合。 1972年，卡爾森（Carlson）利用NaNO3誘導融合了粉蘭煙草和郎氏煙草原生質(zhì)體，培育出世界(sh236。ji232。)第一株體細胞雜種植物。 NaNO3的鈉離子可以中和原生質(zhì)體表面負電荷，引起原生質(zhì)體聚集，促進細胞融合。NaNO3對原生質(zhì)體無損害，但融合效率低，一般小于4%。,第二十二頁，共五十九頁。,（2）高pH的高濃度Ca2+離子(l237。zǐ)誘導融合,1973年，凱勒（Keller）和梅爾切斯（Melchers）發(fā)現(xiàn)采用強堿性（例如pH10.5）的高濃度鈣離子溶液（50mmol/LCaCl2?2H2O）在37℃下處理兩個品系的煙草葉肉原生質(zhì)體，很容易促使融合，融合率可以達到10%。 鈣離子中和原生質(zhì)體膜或細胞膜表面電荷，使彼此緊密接觸，決定質(zhì)膜的穩(wěn)定性和可塑性；高pH能改變(gǎibi224。n)質(zhì)膜的表面電荷，利于細胞融合。,第二十三頁，共五十九頁。,（3）PEG誘導(y242。udǎo),聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)是一種多聚化合物，分子式為H(OHCH2CH2)nOH)。常用的PEG平均分子量在200－20,000之間，分子量1,000以下者為液體，1,000以上者為固體。 PEG分子具有輕微的負極性，可以與具有正極性基團的水分子、蛋白質(zhì)、碳水化合物形成氫鍵，在相鄰的原生質(zhì)體間起到分子橋的作用，使原生質(zhì)體接觸。 當PEG分子被洗脫時，膜電荷發(fā)生紊亂而重新分配。此時，一種原生質(zhì)體上帶正電的基團可能(kěn233。ng)與另外一個原生質(zhì)體中帶
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