動物細(xì)胞融合(編輯修改稿)
2025-10-03 17:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 。 第十七頁，共三十七頁。 2. 有限稀釋法 將細(xì)胞稀釋到 100個 /ml，理論上每 (10μ l)含有 1個細(xì)胞。取 (如 96孔板 )的小孔中培養(yǎng)，那么可獲得單個細(xì)胞形成的集落。 1) 取 ml 5 104/ml細(xì)胞 +4ml培養(yǎng)基稀釋，得 1 104/ml. 2) 取 1 104/ml細(xì)胞液 +培養(yǎng)基稀釋， 得 1 103/ml. 3) 取 103/ml細(xì)胞液 +培養(yǎng)基稀釋，得 100 cells/ml. 4) 取 100 cells/ml細(xì)胞液于培養(yǎng)板小孔，加 ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)后得雜種細(xì)胞系。 第十八頁，共三十七頁。 3. 顯微鏡操作法 通過顯微操作別離雜交單細(xì)胞、分別單獨培養(yǎng)。 4. 蓋片別離法 1) 用釘錘于潔凈的橡膠上砸干凈蓋玻片； 2) 選擇碎塊、大小形態(tài)適用碎片； 3) 加培養(yǎng)液、進行細(xì)胞培養(yǎng)； 4) 倒置鏡下選細(xì)胞，挑出單細(xì)胞玻片； 5) 進行單個細(xì)胞培養(yǎng)。 第十九頁，共三十七頁。 5. 熒光激活別離法 用一種熒光激活細(xì)胞分類器〔 Fluorescence Activated Cell Sorter， FACS〕別離雜交細(xì)胞。 原理：將細(xì)胞經(jīng)熒光抗體染色后，經(jīng)噴嘴形成單個細(xì)胞的線形液滴，在激發(fā)光的激發(fā)下，熒光素發(fā)射熒光，此信號由光電倍增管接收，再結(jié)合細(xì)胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號，經(jīng)電腦處理，產(chǎn)生信號并與預(yù)定的信號比照，根據(jù)細(xì)胞熒光強度及細(xì)胞大小不同，將細(xì)胞分成不同級別，在電場中發(fā)生偏離，而分別收集于不同容器中。 第二十頁，共三十七頁。 第五節(jié) 細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用 動物體受抗原刺激后可產(chǎn)生抗體，抑制抗原的作用；增加身體的抗體就可以提高機體的抗病能力。 抗體具有特異性，其特異性取決于抗原分子的決定簇。 抗原決定簇： 存在于抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團，一般由 5～ 8個氨基酸或單糖或核苷酸殘基組成。 一、 B淋巴細(xì)胞雜交瘤生產(chǎn)單克隆抗體 第二十一頁，共三十七頁。 各種抗原分子具有很多抗原決定簇，不同抗原的決定簇數(shù)目不同，如白喉類毒素有 8個，流感病毒有 40多個?？乖瓫Q定簇大多存在于抗原的外表，但也有隱藏在抗原內(nèi)部。 抗體是由 B淋巴細(xì)胞分化形成的漿細(xì)胞合成、分泌的。每一個 B淋巴細(xì)胞在成熟的過程中只產(chǎn)生一種抗體。動物脾臟有上百萬種不同的 B淋巴細(xì)胞，因此，當(dāng)機體受抗原刺激時，每種 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生一種抗體〔單一抗體〕，整個動物可以產(chǎn)生眾多不同的抗體〔多克隆抗體〕。用免疫動物生產(chǎn)、制備抗體效率低，且多克隆抗體應(yīng)用有很多缺陷，別離這些不同的抗體極為困難。 第二十二頁，共三十七頁。 選出一個合成一種專一抗體的細(xì)胞進行培養(yǎng)，就可得到由單細(xì)胞經(jīng)增殖而形成的細(xì)胞群，即單克隆細(xì)胞。單克隆細(xì)胞合成針對一種抗原決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。單克隆抗體具有理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結(jié)合特異性強、質(zhì)量可控等優(yōu)點，用途： 1．醫(yī)學(xué)診斷試劑 廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫、
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