蛋白質(zhì)的提取ppt課件-展示頁
2025-05-12 06:15本頁面
【正文】 萃取法 ? 層析法 ? 電泳法 （三）純化 （ 1）原理： （ 2）材料：凝膠 大分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快； 小分子穿過多孔凝膠顆粒的內(nèi)部，路程長，流動慢。 破碎紅細(xì)胞；溶解細(xì)胞膜 釋放血紅蛋白。 ? (5)成品加工：測定蛋白質(zhì)的性質(zhì)并干燥成成品。 ? (3)粗提 : 離心除去固體雜質(zhì)后，可通過沉淀法、超濾法、萃取法等處理，得到蛋白質(zhì)粗制品。 ? (2)根據(jù)蛋白質(zhì)的特性，選擇不同的溶劑進(jìn)行 抽提 。 ? (1)生物組織的 機(jī)械破碎 。 ? (1)蛋白質(zhì)來源：微生物細(xì)胞、動物細(xì)胞和植物細(xì)胞； ? (2)隨時(shí)測定蛋白質(zhì)活性并檢測蛋白質(zhì)含量。因此，蛋白質(zhì)的分離與純化技術(shù)便成為蛋白質(zhì)研究的重要技術(shù)。 ? 利用這個(gè)性質(zhì)，可以對蛋白質(zhì)進(jìn)行定性鑒定。 ? 這三種氨基酸的在 280nm 附近有最大吸收。引起變性的主要因素是熱、紫外光、激烈的攪拌以及強(qiáng)酸和強(qiáng)堿等。 4 、蛋白質(zhì)的變性 蛋白質(zhì)的變性 ? 變性蛋白質(zhì)通常都是固體狀態(tài)物質(zhì)，不溶于水和其它溶劑，也不可能恢復(fù)原有蛋白質(zhì)所具有的性質(zhì)。某些物理或化學(xué)因素，能夠破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，引起蛋白質(zhì)理化性質(zhì)改變并導(dǎo)致其生理活性喪失。 ? 如加熱沉淀、強(qiáng)酸堿沉淀、重金屬鹽沉淀和生物堿沉淀等都屬于不可逆沉淀。 可逆沉淀 ? 在強(qiáng)烈沉淀?xiàng)l件下，不僅破壞了蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性，而且也破壞了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沉淀不可能再重新溶解于水。 ? 在沉淀過程中，結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都沒有發(fā)生變化，在適當(dāng)?shù)臈l件下，可以重新溶解形成溶液，所以這種沉淀又稱為非變性沉淀。 ? 改變?nèi)芤旱臈l件，將影響蛋白質(zhì)的溶解性質(zhì) ? 在適當(dāng)?shù)臈l件下，蛋白質(zhì)能夠從溶液中沉淀出來。 ? 由于膠體溶液中的蛋白質(zhì)不能通過半透膜，因此可以應(yīng)用透析法將非蛋白的小分子雜質(zhì)除去。 1 、蛋白質(zhì)的兩性離解和電泳現(xiàn)象 ? 由于蛋白質(zhì)的分子量很大，它在水中能夠形成膠體溶液。在等電點(diǎn)偏酸性溶液中，蛋白質(zhì)粒子帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動；在等電點(diǎn)偏堿性溶液中，蛋白質(zhì)粒子帶正電荷，在電場中向負(fù)極移動。在等電點(diǎn)時(shí) ， 蛋白質(zhì)的溶解度最小，在電場中不移動。第四章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)實(shí)踐 第一節(jié) 生物成分的分離與測定技術(shù) 蛋白質(zhì)的分離與純化 ? 蛋白質(zhì)的性質(zhì) ? 蛋白質(zhì)分離和純化 ? 蛋白質(zhì)的分離步驟 ? 蛋白質(zhì)的純化方法 ? 蛋白質(zhì)含量的測定 ? 蛋白質(zhì)純度等的測定 蛋白質(zhì)存在于生物體的組織細(xì)胞中，不同的生物體組織細(xì)胞所含的蛋白質(zhì)種類、數(shù)量也不盡相同。 一、蛋白質(zhì)的性質(zhì) ? 蛋白質(zhì)與多肽一樣，能夠發(fā)生兩性離解，也有等電點(diǎn)。 ? 在不同的 pH環(huán)境下，蛋白質(zhì)的電學(xué)性質(zhì)不同。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)電泳 。蛋白質(zhì)溶液具有膠體溶液的典型性質(zhì)，如丁達(dá)爾現(xiàn)象、布郎運(yùn)動等。 2 、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) ? 蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性與它的分子量大小、所帶的電荷和水化作用有關(guān)。 3 、蛋白質(zhì)的沉淀作用 ? 在溫和條件下，通過改變?nèi)芤旱?pH或電荷狀況，使蛋白質(zhì)從膠體溶液中沉淀分離。 ? 可逆沉淀是分離和純化蛋白質(zhì)的基本方法，如等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法和有機(jī)溶劑沉淀法等。 ? 由于沉淀過程發(fā)生了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的變化，所以又稱為變性沉淀。 不可逆沉淀 ? 蛋白質(zhì)的性質(zhì)與它們的結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性 。所以，蛋白質(zhì)的變性通常都伴隨著不可逆沉淀。 ? 大部分蛋白質(zhì)均含有帶芳香環(huán)的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。因此，大多數(shù)蛋白質(zhì)在 280nm 附近顯示強(qiáng)的吸收。 5 、蛋白質(zhì)的紫外吸收 要研究某種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和功能，就
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