【正文】 。每個孔計(jì)數(shù)2次，得出細(xì)胞濃度平均值。然后，將細(xì)胞懸液等量加入培養(yǎng)板的每個孔中，培養(yǎng)時間7天。⑶衰退期:此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡。⑵傳代期:細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中（不論稀釋與否）。8簡述體外培養(yǎng)細(xì)胞的分期？⑴原代培養(yǎng)期:取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng) 原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強(qiáng)，細(xì)胞克隆形成率低。原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強(qiáng)，細(xì)胞克隆形成率低。（5）培養(yǎng)液的溫度: 低溫會減低細(xì)胞的活動，妨礙黏附和貼壁 。（4）培養(yǎng)液中離子成分及其濃度。（2）減少接種時培養(yǎng)液的量：待細(xì)胞粘附和貼壁之后，再補(bǔ)充足夠的培養(yǎng)液。流動：培養(yǎng)液流動可阻止細(xì)胞附著。（2）生物因素：血清、培養(yǎng)液中的促附著因子。密度抑制（density inhibition）：細(xì)胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象。機(jī)制：接觸抑制、密度依賴性。對數(shù)生長期：細(xì)胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。潛伏期此時細(xì)胞有生長話動，而無細(xì)胞分裂。貼壁期：細(xì)胞附著于底物上，游離期 結(jié)束。轉(zhuǎn)化與否：未轉(zhuǎn)化，成纖維樣，轉(zhuǎn)化后，可成上皮樣。細(xì)胞密度 3T3：低密度，成纖維細(xì)胞樣，高密度，上皮樣細(xì)胞。血清，Hela：高血清成纖維細(xì)胞樣低血清上皮樣細(xì)胞。培養(yǎng)條件：不同的細(xì)胞對培養(yǎng)基需求不同，當(dāng)前尚無一種培養(yǎng)基是萬能的，應(yīng)選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基。組織和細(xì)胞供體年齡：幼年個體比老年者易于培養(yǎng)，所有動物的胚胎組織都是最好的培養(yǎng)對象。培養(yǎng)技術(shù)方法。培養(yǎng)條件。特點(diǎn)：在懸浮液中生長良好、細(xì)胞圓形，單個或小細(xì)胞團(tuán)。：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似的細(xì)胞來源：由中胚層間質(zhì)組織起源的組織如：真正的成纖維細(xì)胞；心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài) 胞體梭形或不規(guī)則三角形胞質(zhì)向外伸出2—： 排列成放射狀，漩渦狀 并不緊靠連成片， 細(xì)胞—細(xì)胞接觸易斷開而單獨(dú)行動,游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞，(不定型)：本型細(xì)胞在支持物上散在生長，一般不連成片。生長特點(diǎn)：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪路石狀。來源：來源于外胚層，內(nèi)胚層細(xì)胞 如：皮膚及其衍生物 ；消化道，乳腺，肺泡 ；上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞。（細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化特征、生理功能為細(xì)胞分化的三項(xiàng)指標(biāo)），由于體外培養(yǎng)細(xì)胞失去了神經(jīng)、激素等體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間相互影響，經(jīng)多次傳代增殖，久之則發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象逐漸減弱或不顯，形態(tài)與功能趨于單一化，或傳一定代數(shù)后衰老死亡；發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲不死性而成為能無限傳代的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。用于研究細(xì)胞、組織的代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，各種理化因子對活細(xì)胞的影響。1細(xì)胞培養(yǎng)的概念？習(xí)慣上泛指所有的體外培養(yǎng)，即器官培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，和細(xì)胞培養(yǎng)的總稱。 在無菌條件下,從動物(植物也可)或在人體中取出組織或細(xì)胞,置于模擬體內(nèi)的生理環(huán)境中(無菌,適當(dāng)?shù)臏囟群鸵欢ǖ臓I養(yǎng)條件)使之生存和增殖生長的技術(shù)方法。2體外細(xì)胞的分化特點(diǎn)？細(xì)胞分化：在個體發(fā)育過程中，子代細(xì)胞產(chǎn)生形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能差異的過程。 3體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型 ？并說明各自的形態(tài)特點(diǎn)?分型:1 貼壁型細(xì)胞(上皮細(xì)胞型,成纖維細(xì)胞型,游走細(xì)胞型) 2懸浮型細(xì)胞. :僅形態(tài)上似體內(nèi)上皮細(xì)胞，實(shí)際上不完全等于體內(nèi)同名的細(xì)胞。扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核。生長時呈膜狀移動，很少脫離細(xì)胞群而單個活動。細(xì)胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運(yùn)動，．懸浮生長型細(xì)胞概念：:來自血，脾或骨髓，尤以血中白細(xì) 胞多見，癌腫細(xì)胞也可能。優(yōu)點(diǎn)：生存空間大，提供數(shù)量大， 傳代方便(不需消化) ：觀察不方便 很多細(xì)胞不能懸浮生長(尤以正常細(xì)胞)4那些培養(yǎng)條件改變時，細(xì)胞形態(tài)可有變化？（見表一）組織和細(xì)胞供體年齡。細(xì)胞的粘附。促生長因子。來自同一個體的組織，分化低的比分化高的容易培養(yǎng)。應(yīng)了解所培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)形狀和特殊需求成分。pH，Hela：太酸或太堿，成纖維細(xì)胞樣；標(biāo)準(zhǔn)pH，上皮樣細(xì)胞。生長狀態(tài)改變：懸浮或貼附：懸浮時圓形 ，貼附成纖維或上皮樣。 5簡述每代貼附生長細(xì)胞的生長過程分哪幾期？游離期 ： 細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮 狀態(tài)．也稱懸浮期此時細(xì)胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。細(xì)胞株平均在10分鐘～4小時貼壁。細(xì)胞株潛伏期一般為6～24小時。停止期（平臺期）：細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂。（接觸抑制：當(dāng)一個貼壁生長的體外正常細(xì)胞生長至與另一個細(xì)胞的表面相互接觸時，便停止了分裂增殖，相互雖然緊密接觸，但不形成交叉重疊生長，也不進(jìn)入S期。 6影響貼壁的因素和促進(jìn)細(xì)胞粘附措施有哪些？1因素：（1）各種細(xì)胞強(qiáng)弱： (附著最強(qiáng))巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞；上皮細(xì)胞、血細(xì)胞(最弱)。（3）機(jī)械，物理等因素（離心：促進(jìn)附著。低溫：可抑制附著）2措施：（1）包被：對分化程度高、生長能力差的細(xì)胞，可在培養(yǎng)瓶皿表面包被有利于細(xì)胞粘附和生長的生物活性物質(zhì). 血清內(nèi)含有多種能夠促進(jìn)細(xì)胞粘附的成分，細(xì)胞本身也可能產(chǎn)生一些粘附分子。（3）減少培養(yǎng)液中血清的含量，使培養(yǎng)液黏度降低。如，培養(yǎng)液中的Ca2+含量過低時不利于細(xì)胞的粘附、貼壁和鋪展。7原代培養(yǎng)的概念：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng) 。此期一般持續(xù)1～4周。此期一般持續(xù)1～4周。持續(xù)時間最長，其特 點(diǎn)是細(xì)胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型。9舉例說明細(xì)胞生長曲線的制作方法？⑴計(jì)算細(xì)胞濃度2次，得出細(xì)胞濃度平均值。⑵每隔24小時吸去3個孔的培養(yǎng)板，加入消化液，混懸細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞數(shù)目。⑶繪制細(xì)胞生長曲線，橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時間，縱坐標(biāo)為細(xì)胞濃度。（2） 細(xì)胞的生存環(huán)境：溫度: 37 ℃、O2 、CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCOpH: 、滲透壓。 （4） 無毒11. 選擇血清需注意事項(xiàng)有哪些？注意事項(xiàng)：①血清質(zhì)量好壞是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。③優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染。⑤血清的消毒：過濾除菌⑥一般說來．含5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死．但支持細(xì)胞生長一般需加 10％血清．⑦對于血清支持細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚．⑧血清中不僅存在促細(xì)胞生長因子，同對也存在細(xì)胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞所反映的生物學(xué)特性是細(xì)胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。？簡述過濾除菌的全過程？將液體或氣