09級細胞生物學(xué)技術(shù)(參考版)
2025-04-07 23:01本頁面
【正文】 炎癥反應(yīng) 細胞凋亡無，不釋放細胞內(nèi)容物；細胞壞死有，釋放內(nèi)容物。蛋白質(zhì)合成 細胞凋亡有；細胞壞死無。凋亡小體 細胞凋亡有，被鄰近細胞或巨噬細胞吞噬；細胞壞死無，細胞自溶。細胞器 細胞凋亡無明顯變化；細胞壞死是腫脹和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)崩解。細胞膜 細胞凋亡是保持完整一直到形成調(diào)亡小體；細胞壞死是破損。TUNEL法檢測細胞凋亡細胞凋亡和細胞壞死的區(qū)別：起因 細胞凋亡是生理或病理性的；細胞壞死是病理性變化或劇烈損傷。細胞凋亡的主要檢查手段。Annexin V聯(lián)合PI法。顯微鏡也是如此，其最小分辨距離也是有一定限度的。正常人眼在照明良好的情況下，若小于這個距離，就分辨不清是兩個物體點，而被誤認為是一點。好的顯微鏡最大可放大2000倍，可分辨相距1X10－6cm的兩點。機械裝置主要包括鏡筒、鏡柱、載物臺、鏡座、粗細調(diào)節(jié)螺旋等部分5熒光顯微鏡在細胞生物學(xué)研究中有什么應(yīng)用？5比較放大率與分辨率的含義。7)汞燈光源點亮后至少點燈15分，關(guān)閉后等待35分再開5光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)光學(xué)顯微鏡在結(jié)構(gòu)上分為光學(xué)系統(tǒng)和機械裝置兩個部分。4)熒光顯微照相時，因曝光時間相對較長，可采用感光度較快的膠片 5)避免直視紫外線光源，將紫外線防護板(黃色)裝在載物臺前以防紫外線損傷視網(wǎng)膜。3)標本所發(fā)的熒光較弱，觀察時應(yīng)盡可能在較暗的室內(nèi)條件下進行。2)在油浸觀察時，應(yīng)采用“無熒光油”，在使用U和V激發(fā)方式觀察時更應(yīng)注意。5熒光顯微鏡使用的注意事項：1)長時間的激發(fā)光照射標本，會發(fā)生熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射(觀察)時間。④核酸內(nèi)切酶活化，導(dǎo)致染色質(zhì)DNA在核小體連接部位斷裂，形成約200bp整數(shù)倍的核酸片段，凝膠電泳圖譜呈梯狀；⑤凋亡通常是生理性變化 5根據(jù)標本染色的不同如何選擇濾光片：染成藍色或綠色的標本使用紅色濾光片、染成紅色的標本使用綠色濾光片、染成黃色或棕色的標本使用藍色濾光片、染成紫色的標本使用綠色濾光片、染成藍——紫色的標本使用黃色濾光片5細胞凋亡的生物學(xué)意義。50、熒光激發(fā)濾色鏡分哪幾類?各自的激發(fā)波長是多少？激發(fā)濾色鏡為觀察不同性質(zhì)的物體所設(shè)計的濾色鏡或濾色鏡組，通?？煞譃樽贤饧ぐl(fā)(U激發(fā))、紫色激發(fā)(V激發(fā))、藍色激發(fā)(B激發(fā))和綠色激發(fā)(G激發(fā))等四種。能夠誘發(fā)細胞凋亡的因素很多，如射線、能夠引起染色體損傷的藥物、細胞自身表達的一些受體分子等。值得注意的是 ,PI不能通過細胞膜完整的細胞4細胞凋亡：凋亡（或程序性細胞死亡）是一個生理性的細胞自我毀滅的過程，在胚胎發(fā)育、生物體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及多細胞生物防御外在及內(nèi)在傷害方面均起著非常重要的作用。由于細胞周期各時相的DNA含量不同 ,通常正常細胞的G1 /G0期具有二倍體細胞的DNA含量 (2N) ,而G2 /M期具有四倍體細胞的DNA含量 (4N) ,而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3’OH形成，很少能夠被染色。+依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機切斷，形成180～200bp核小體DNA多聚體。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 178。亞二倍體峰的出現(xiàn)，實際上是由于細胞凋亡時DNA含量低于正常細胞，使其在直方圖上表現(xiàn)為一個熒光強度比正常細胞要小的峰（亞二倍體峰），即凋亡細胞DNA對PI可染性降低。碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。AnnexinV是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。 43. 簡述磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V法)聯(lián)合PI法檢測細胞凋亡的原理。但由于目前所使用的各種熒光染料都是寬發(fā)射譜性質(zhì)，雖然它們之間各自發(fā)射峰值各不相同，但發(fā)射譜范圍有一定的重疊，F(xiàn)ITC探測器會探測到少量的PE光譜，而PE探測器則檢測到較多的FITC光譜。（安裝488和635nm激光）能同時檢測到的六大參數(shù)分別是什么？41. 簡述流式細胞儀的特點和檢測范圍。因此，將數(shù)據(jù)用圖形顯 示更直觀，然后再進行統(tǒng)計分析，這是FCM結(jié)果分析中最常用的分析方法。HLAB27軟件首先在FSCFL2的點圖上確定CD3強陽性細胞群體的位置，設(shè)定一個CD3+T淋巴細胞門，然后再根據(jù)FSC設(shè)定光散射門，去除FSC過大或過小的細胞，確保門內(nèi)至少有50%的CD3+T淋巴細胞，這樣通過二者的結(jié)合，將隨后進行的分析嚴格地定位在T淋巴細胞上。1HLAB27分析2細胞周期分析3凋亡分析4淋巴細胞亞群分析5白血病分型6細胞因子分析7血小板分析8干細胞分析9流式細胞儀在其它方面的應(yīng)用。，評價一個樣品制備的優(yōu)劣，有哪三個評價指標？①細胞的密度，不能低于1106/ml ②非特異熒光，不超過1％.③細胞碎片和聚集體，不能出現(xiàn)肉眼可見的團塊。液柱與入射的高度聚焦的激光束相交，此時，細胞上的熒光染料被激發(fā)而產(chǎn)生特異性熒光。，鞘液有哪些作用？鞘液的作用有二：一是約束樣品使之在噴嘴中心以提高測量精度；二是防止樣品靠近噴孔壁以避免堵塞噴孔。 這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號，再通過模／數(shù)轉(zhuǎn)換器，將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號。前向光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大小。 2 側(cè)向角散射，即SSC，是指與激光束正交90度方向的散射信號，它對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更敏感，可以提供細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)及顆粒性質(zhì)的信息. 這兩種信號同時被前向光電二極管和90176。通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測，得到該細胞的光散射和熒光指標，分析出其體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等物理及化學(xué)特征。 流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。在血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、藥物學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科廣泛應(yīng)用。與傳統(tǒng)熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優(yōu)點， 成為當(dāng)代最先進的細胞定量分析技術(shù)。它不僅可測量細胞大小、內(nèi)部顆粒的性狀, 還可檢測細胞表面和細胞漿抗原、細胞內(nèi)DNA、RNA含量等,可對群體細胞在單細胞水平上進行分析,流式細胞術(shù)是二十世紀七十年代發(fā)展起來的高科學(xué)技術(shù),流式細胞儀集計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、細胞化學(xué)、細胞免
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1