09級細胞生物學(xué)技術(shù)(已修改)
2025-04-16 23:01 本頁面
【正文】 1細胞培養(yǎng)的概念？習(xí)慣上泛指所有的體外培養(yǎng)，即器官培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，和細胞培養(yǎng)的總稱。 在無菌條件下,從動物(植物也可)或在人體中取出組織或細胞,置于模擬體內(nèi)的生理環(huán)境中(無菌,適當?shù)臏囟群鸵欢ǖ臓I養(yǎng)條件)使之生存和增殖生長的技術(shù)方法。用于研究細胞、組織的代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，各種理化因子對活細胞的影響。2體外細胞的分化特點？細胞分化：在個體發(fā)育過程中，子代細胞產(chǎn)生形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能差異的過程。（細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化特征、生理功能為細胞分化的三項指標），由于體外培養(yǎng)細胞失去了神經(jīng)、激素等體液的調(diào)節(jié)和細胞間相互影響，經(jīng)多次傳代增殖，久之則發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象逐漸減弱或不顯，形態(tài)與功能趨于單一化，或傳一定代數(shù)后衰老死亡；發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲不死性而成為能無限傳代的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。 3體外培養(yǎng)細胞的分型 ？并說明各自的形態(tài)特點?分型:1 貼壁型細胞(上皮細胞型,成纖維細胞型,游走細胞型) 2懸浮型細胞. :僅形態(tài)上似體內(nèi)上皮細胞，實際上不完全等于體內(nèi)同名的細胞。來源：來源于外胚層，內(nèi)胚層細胞 如：皮膚及其衍生物 ；消化道，乳腺，肺泡 ；上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細胞。扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核。生長特點：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪路石狀。生長時呈膜狀移動，很少脫離細胞群而單個活動。：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細胞類似的細胞來源：由中胚層間質(zhì)組織起源的組織如：真正的成纖維細胞；心肌，平滑肌，成骨細胞形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài) 胞體梭形或不規(guī)則三角形胞質(zhì)向外伸出2—： 排列成放射狀，漩渦狀 并不緊靠連成片， 細胞—細胞接觸易斷開而單獨行動,游離的單獨的成纖維樣細胞，(不定型)：本型細胞在支持物上散在生長，一般不連成片。細胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運動，．懸浮生長型細胞概念：:來自血，脾或骨髓，尤以血中白細 胞多見，癌腫細胞也可能。特點：在懸浮液中生長良好、細胞圓形，單個或小細胞團。優(yōu)點：生存空間大，提供數(shù)量大， 傳代方便(不需消化) ：觀察不方便 很多細胞不能懸浮生長(尤以正常細胞)4那些培養(yǎng)條件改變時，細胞形態(tài)可有變化？（見表一）組織和細胞供體年齡。培養(yǎng)條件。細胞的粘附。培養(yǎng)技術(shù)方法。促生長因子。組織和細胞供體年齡：幼年個體比老年者易于培養(yǎng)，所有動物的胚胎組織都是最好的培養(yǎng)對象。來自同一個體的組織，分化低的比分化高的容易培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：不同的細胞對培養(yǎng)基需求不同，當前尚無一種培養(yǎng)基是萬能的，應(yīng)選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基。應(yīng)了解所培養(yǎng)細胞的生物學(xué)形狀和特殊需求成分。血清，Hela：高血清成纖維細胞樣低血清上皮樣細胞。pH，Hela：太酸或太堿，成纖維細胞樣；標準pH，上皮樣細胞。細胞密度 3T3：低密度，成纖維細胞樣，高密度，上皮樣細胞。生長狀態(tài)改變：懸浮或貼附：懸浮時圓形 ，貼附成纖維或上皮樣。轉(zhuǎn)化與否：未轉(zhuǎn)化，成纖維樣，轉(zhuǎn)化后，可成上皮樣。 5簡述每代貼附生長細胞的生長過程分哪幾期？游離期 ： 細胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮 狀態(tài)．也稱懸浮期此時細胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。貼壁期：細胞附著于底物上，游離期 結(jié)束。細胞株平均在10分鐘～4小時貼壁。潛伏期此時細胞有生長話動，而無細胞分裂。細胞株潛伏期一般為6～24小時。對數(shù)生長期：細胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進行實驗研究。停止期（平臺期）：細胞長滿瓶壁后，細胞雖有活力但不再分裂。機制：接觸抑制、密度依賴性。（接觸抑制：當一個貼壁生長的體外正常細胞生長至與另一個細胞的表面相互接觸時，便停止了分裂增殖，相互雖然緊密接觸，但不形成交叉重疊生長，也不進入S期。密度抑制（density inhibition）：細胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象。 6影響貼壁的因素和促進細胞粘附措施有哪些？1因素：（1）各種細胞強弱： (附著最強)巨噬細胞、成纖維細胞；上皮細胞、血細胞(最弱)。（2）生物因素：血清、培養(yǎng)液中的促附著因子。（3）機械，物理等因素（離心：促進附著。流動：培養(yǎng)液流動可阻止細胞附著。低溫：可抑制附著）2措施：（1）包被：對分化程度高、生長能力差的細胞，可在培養(yǎng)瓶皿表面包被有利于細胞粘附和生長的生物活性物質(zhì). 血清內(nèi)含有多種能夠促進細胞粘附的成分，細胞本身也可能產(chǎn)生一些粘附分子。（2）減少接種時培養(yǎng)液的量：待細胞粘附和貼壁之后，再補充足夠的培養(yǎng)液。（3）減少培養(yǎng)液中血清的含量，使培養(yǎng)液黏度降低。（4）培養(yǎng)液中離子成分及其濃度。如，培養(yǎng)液中的Ca2+含量過低時不利于細胞的粘附、貼壁和鋪展。（5）培養(yǎng)液的溫度: 低溫會減低細胞的活動，妨礙黏附和貼壁 。7原代培養(yǎng)的概念：取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng) 。原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強，細胞克隆形成率低。此期一般持續(xù)1～4周。8簡述體外培養(yǎng)細胞的分期？⑴原代培養(yǎng)期:取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng) 原代培養(yǎng)與體內(nèi)原組織很相似，具異質(zhì)性，相互依存性強，細胞克隆形成率低。此期一般持續(xù)1～4周。⑵傳代期:細胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中（不論稀釋與否）。持續(xù)時間最長，其特 點是細胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型。⑶衰退期:此期細胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，細胞形態(tài)輪廓增強，最后衰退凋亡。9舉例說明細胞生長曲線的制作方法？⑴計算細胞濃度2次，得出細胞濃度平均值。然后，將細胞懸液等量加入培養(yǎng)板的每個孔中，培養(yǎng)時間7天。⑵每隔24小時吸去3個孔的培養(yǎng)板，加入消化液，混懸細胞，計算細胞數(shù)目。每個孔計數(shù)2次，得出細胞濃度平均值。⑶繪制細胞生長曲線，橫坐標為培養(yǎng)時間，縱坐標為細胞濃度。10. 體外培養(yǎng)細胞生長的條件（1） 細胞的營養(yǎng)需要：氨基酸、單糖、維生素、無機離 子、微量元素、激素、生長因子等。（2） 細胞的生存環(huán)境：溫度: 37 ℃、O2 、CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCOpH: 、滲透壓。（3） 無污染。 （4） 無毒11. 選擇血清需注意事項有哪些？注意事項：①血清質(zhì)量好壞是實驗成敗的關(guān)鍵。②常用血清有胎牛血清（剖腹產(chǎn)）、新生牛血清（小于24h）、小牛血清（10～30D）、兔血清、馬血清等，其中以胎牛血清質(zhì)量最好。③優(yōu)質(zhì)血清的標準：透明，淡黃色，無沉淀物，無細菌、支原體、病毒污染。④血清的滅活（消除補體活性）：56 ℃ ，30 分鐘。⑤血清的消毒：過濾除菌⑥一般說來．含5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細胞可以維持細胞不死．但支持細胞生長一般
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