目的基因的獲取ppt課件-展示頁
2025-01-24 05:38本頁面
【正文】 TTTTTTTT5’ 引物 1 AAAAAAA3’ 加入簡并引物 變性、退火、延伸 AAAAAAA3’ TTTTTTTT5’ 四、依據(jù)基因部分序列信息獲得基因全長序列 反向 PCR (inverse PCR, IPCR) 盒式 PCR RACE技術 ? 反向 PCR：根據(jù)已知 DNA區(qū)的序列設計引物，以包含已知區(qū)和未知區(qū)的環(huán)化 DNA分子為模板來擴增未知DNA區(qū)序列的 PCR技術。 5‘ 5‘ 目的基因 5‘ 變性 加熱 5‘ 5‘ 引物 退火 5‘ 5‘ 底物 聚合 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 加熱 變性 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 退火 引物 底物 聚合 加熱 變性 引物 退火 底物 聚合 1 2 3 二、 特點： ； ，如用于基因重組表達，須進行 DNA序列分析。 化學合成的單元操作 OHGHH HHOCH2OD M TPOMeNCHMeMeCHMeMeO H G H H H H O CH 2 O DMT P O Me N CH Me Me CH Me Me H DMT： 二甲氧基三苯甲基 激活 縮合 氧化 脫取代基 可控微孔玻璃珠 CPG 連接臂 五、基因的組裝 目前合成能力 200b以內(nèi)，若要合成更長的基因，則需要先合成短的序列，然后再拼接到一起啊，稱為基因的組裝。 第四章 目的基因的獲取 第一節(jié) 化學合成目的基因 第二節(jié) PCR擴增獲得目的基因 第三節(jié) 篩選基因文庫獲取目的基因 第四節(jié) 轉(zhuǎn)座子標簽法獲得目的基因 第五節(jié) 圖位克隆獲得目的基因 第六節(jié) mRNA差別顯示技術獲得差異表達的基因 第七節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)獲得目的基因 第一節(jié) 化學合成目的基因 ?要求： 已知目的基因的核苷酸序列； 較短的 DNA片段 。 pUC11 119是 —— 載體。 質(zhì)粒的三種構型在瓊脂糖凝膠電泳中速度最快的是 —— 。 寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象涉及到的兩種酶是 和 。復 習 題 熱穩(wěn)定性較好，可用來進行特定核苷酸序列的體外擴增； 可以在體外以 mRNA為模板合成 cDNA； 為避免載體自連，可以用 將 DNA的5’ 磷酸基團去除。 可以去除 DNA片段中突出的單鏈尾巴。 質(zhì)粒的復制類型可分為 —— 和 —— 兩種。 pUC18/19是 —— 載體。 年被公認為基因工程元年。 ?應用范圍： 1）合成 PCR引物 2）寡核苷酸探針 3）人工接頭 4）較小的基因 固相亞磷酸三酯法 一、基本原理 二、支持物 可控微孔玻璃珠（ CPG） 三、單體
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