目的基因的獲取ppt課件-wenkub.com
2025-01-12 05:38 本頁面
【正文】 獲取目的基因的選擇策略 ?已知目的基因的部分序列，或其他物種中同源基因的保守序列； ?已知基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物； ?已知與目的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記或有可操作的功能性轉(zhuǎn)座子； ?組織、細(xì)胞或誘導(dǎo)特異表達(dá)。 ?應(yīng)用于真核基因的表達(dá)調(diào)控，細(xì)胞粘合因子間的相互作用、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以及細(xì)胞周期與分化、反式因子的鑒定與分離等研究。其中 M為除了 T以外的任何一種核苷酸（即 A、 G或 C），而 N則為任何一種核苷酸（即 A、 G、 C或 T），故 MN共有 12種不同的排列組合方式。這種引物通常叫作 339。 第六節(jié) mRNA差別顯示技術(shù)獲得差異表達(dá)的基因 ?mRNA差異顯示技術(shù)（ mRNA differetial display）：將 mRNA逆轉(zhuǎn)錄和 PCR技術(shù)結(jié)合起來的一種 RNA指紋圖譜技術(shù)，因此稱 DDRTPCR。 ? 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法 導(dǎo)入 轉(zhuǎn)座子 含轉(zhuǎn)座子的顯性純合體 AA* 隱性純合體 aa 突變或隱性表型 A*a 顯性表型 Aa aa A*a A*A* 篩選 構(gòu)建基因文庫 第五節(jié) 圖位克隆獲得目的基因 ?圖位克?。?mapbased cloning），又稱定位克隆，基于某些生物已制備出精確的遺傳圖譜。 二、 cDNA文庫 (plementary DNA library)的構(gòu)建 cDNA文庫： 以 mRNA為模板在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下將形成的互補(bǔ) DNA（ cDNA）經(jīng)過重組擴(kuò)增得到的基因文庫。 For example : 期望值為 ，插入片斷為 20kb的 ( 106 bp) 和 human (3 109 bp) 基因組的克隆數(shù)的計(jì)算 N = = 103 ln( ) ln[1(2 104/ 106)] Nhuman= = 105 ln() ln[1(2 104/3 109)] 一、基因組文庫 （ genomic library） 的構(gòu)建 ：將某一生物基因組 DNA片段化并全部克隆后所獲得的重組子群體的總稱。以 mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA第一條鏈后，用 PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到 3’或 5‘之間的未知序列的方法，分別稱 3’RACE或 5‘RACE。 三、逆轉(zhuǎn)錄 PCR（ RTPCR) mRNA cDNA PCR 已知目的基因序列的 RTPCR 從基因編碼部分氨基酸序列出發(fā)的RTPCR mRNA 5‘ AAAAAA3’ RTGSP 逆轉(zhuǎn)錄 5’ AAAAAA3’ RTGSP 變性、退火 5‘ AA
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