農(nóng)產(chǎn)品分析3-2-文庫吧資料
2025-03-05 13:53本頁面
【正文】 對(duì)測定結(jié)果有影響 要調(diào)節(jié)稱樣量，加入丙酸酐及未加入丙酸酐的兩份樣品殘余染料濃度應(yīng)彼此接近（ 濃度差不大于 ），殘余染料的濃度在： ～。 如果剩余染料溶液的濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)稱樣量應(yīng)作適當(dāng)調(diào)整。丙酸? 結(jié)果計(jì)算由測得的透光率 T或吸收值 A，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得或由回歸線計(jì)算得到剩余染料溶液的濃度（ mmol/L),樣品中的賴氨酸的濃度按下式計(jì)算：l 說明及注意事項(xiàng)216。CH3—CH2—COOH+e—HN—C—CH2—CH3234。丙酸酐174。CH3—CH2—C—O—C—CH2—CH3賴氨酸的 234。234。O DBL法的原理 在較強(qiáng)酸性 (pH值 23)條件下 ,樣品蛋白質(zhì)中的 3種堿性氨基酸 ,即賴氨酸、組氨酸和精氨酸可與酸性橙 12染料 (AO12,一種單磺酸鹽 )分子結(jié)合 ,生成不溶性絡(luò)合物， 其染料的被結(jié)合量相當(dāng)于賴氨酸、組氨酸和精氨酸的總和 ；178。 離子交換色譜法仍然被認(rèn)為是標(biāo)準(zhǔn)法，但儀器昂貴不能普及。 國內(nèi)外應(yīng)用最廣的分析方法有 : 三硝基苯磺酸法、 2氯 3,5二硝基吡啶法、離子交換色譜法 (氨基酸自動(dòng)分析儀法 ) 、 DBL法。它在谷物貯存、加工過程中，又很不穩(wěn)定，易于脫去氮基、被氧化或是發(fā)生變質(zhì)而損失破壞，或變成營養(yǎng)上的 ‘‘ 無效 ” ，提高谷物及谷物產(chǎn)品中賴氨酸的含量已引起農(nóng)業(yè)育種專家及營養(yǎng)學(xué)家的注意，所以， 提高籽粒賴氨酸含量已列為谷物新品種選育的主要選育目標(biāo)之一 。178。 賴氨酸的測定 （染料結(jié)合賴氨酸法 DBL法）178。注意事項(xiàng)： W：樣品的重量 (克 )。氨基酸態(tài)氮 (％ )=[ N(V2V1)]/W100式中： V2：用麝香草酚酞為指示劑時(shí)標(biāo)準(zhǔn)堿液消耗量 (毫升） V1：用中性紅作指示劑時(shí)堿液的消耗量 (m1)。 計(jì)算： 試劑：三種試劑同單指示劑法 ％中性紅 (50％乙醇溶液 ) 操作步驟： 取相同的兩份樣品，分別注入 100毫升三角燒瓶中，一份加入中性紅指示劑 23滴，用 NaOH溶液滴定終點(diǎn) (由紅變琥珀色 )，記錄用量，另一份加入麝香草酚酞 3滴和中性甲醛 20ml，搖勻，以 藍(lán)色。 PH值在 ，而雙指示劑是以氨基酸溶液的 PH值作為中性紅的終點(diǎn)， PH值為 ，從理論計(jì)算看，雙色滴定法較為準(zhǔn)確。與單色法相同，只是在此法中使用了兩種指示劑。? 雙指示劑甲醛滴定法 V： NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗的總量 (m1) W：樣品溶液相當(dāng)樣品重量 (克 )。V100記錄兩次滴定所消耗的堿液毫升數(shù)，用下述公式計(jì)算計(jì)算：加入中性甲醛 20毫升，搖勻，靜置 1分鐘，此時(shí)藍(lán)色應(yīng)消失。 。 試劑 40％ 中性甲醛溶液，以麝香草酚酞為指示劑，用 1MNaOH溶液中和。由于這二個(gè)基的相互作用，使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。單指示劑甲醛滴定法 氨基酸總量 (氨態(tài)氮 )的測定178。? 用離子交換柱層析測定的氨基酸圖譜如圖 11， 2所示178。? 定量測定的依據(jù) 是氨基酸和茚三酮反應(yīng)生成 紫色化合物 。因此，除注意 N2氣保護(hù)外，茚三酮試劑不可過量配制和長期使用 。因此，除氨柱可重復(fù)連續(xù)使用。微生物、蛋白質(zhì)污染（游離氨基酸樣品）、金屬離子污染、油膩污染等。? 緩沖液的 pH與 Na+濃度 溶液的 pH值和鈉離子濃度對(duì)氨基酸的分離有很大關(guān)系，配制不當(dāng)會(huì)影響峰的位置，甚至?xí)箓€(gè)別氨基酸丟失，因此應(yīng)特別精心配制。其生成的黃色化合物在 440nm下進(jìn)行比色測定。? 流速 :。 實(shí)驗(yàn)條件? 實(shí)驗(yàn)儀器 :HITACHI83550型高速氨基酸自動(dòng)分析儀? 色譜條件 :色譜柱 :150mm。一般為每種氨基酸 右 (水解樣品干重約 )。蛋白質(zhì)中的 胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸和色氨酸 在酸水解條件下不穩(wěn)定， 需采用另外的處理方法，即 胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸首先在控制條件下用過甲酸氧化 ， 使它們轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)酸穩(wěn)定的氧化物磺基丙氨酸和蛋氨酸砜， 然后 再用鹽酸水解法 從蛋白質(zhì)中分離出來 . 色氨酸則采用堿水解法 從蛋白質(zhì)中分離出來。l 測定樣品處理 除去脂肪等雜質(zhì)后的待測樣品，可直接上柱分析。? 試樣配制：準(zhǔn)確稱取一定量的試樣 W，加入一定量內(nèi)標(biāo)
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