【正文】 十分密切 ， 觀察 HIV感染者病毒 RNA水平可大致預(yù)測其發(fā)病的可能 。 通常在病毒載量達(dá)到一定水平后 （ 如35， 000?50， 000c/ml） 抗病毒治療才具有良好的效果 。 ? 4） 指導(dǎo)治療方案及療效判定 ? 臨床實(shí)踐證明 ， 并非在任何情況下 HIV感染者都應(yīng)該進(jìn)行抗病毒治療 。 因此定期進(jìn)行病毒載量的檢測有助于確定疾病發(fā)展的階段 ， 以確定相應(yīng)的治療方案 。 ? 目前國際上正在嘗試使用這種檢測對采供血樣品進(jìn)行多個(gè)樣品混合后的 RNA檢測以減少窗口期危險(xiǎn) （ 降低 “ 殘余危險(xiǎn)度 ” ） 。 因此早期病毒 RNA測定具有特殊的意義 。 而在感染早期 ， 在抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個(gè)病毒載量的高峰 ， 此高峰通常高于發(fā)病時(shí)的血漿病毒水平 ， 并且有證據(jù)表明這個(gè)時(shí)期的病毒具有很高的感染能力 。因此 ， 使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷 。 ? 需要指出的是 ， 每一種 RNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測限 ， 即可以測出的最低拷貝數(shù) ， 通常在50?100c/ml以上 ， RNA定量檢測時(shí)未測出不等于樣品中不含有病毒 RNA。 4 小時(shí)之內(nèi)分離血清或血漿，運(yùn)輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍 ? （ 5） HIV核酸定量檢測的意義 ? 1） 輔助診斷 ? 在一般情況下 ， HIV抗體檢測足以對 HIV感染與否做出正確診斷 ， 但在特殊情況下 ， 單純抗體檢測不足以完成明確的判定 ， 如出現(xiàn)某些非典型的抗體反應(yīng)形式 ， 特別是不確定反應(yīng)時(shí) ，RNA的測定可提供非常有用的證據(jù) 。 動態(tài)范圍 標(biāo)準(zhǔn)：（ 版） 400 750 , 0 0 0 c / m l 超敏：（ 版） 50 75 , 0 0 0 c / m l bDNA 3 . 0 版： 75 500 , 0 0 0 c / m l N u c l i s e n s H I V 1 Q T ： 176 3 , 5 0 0 , 0 0 0 c / m l 取決于標(biāo)本量 擴(kuò)增的亞型 版：只有 B 亞型 版： B G A H A G 標(biāo)本量 A m p l i c o r 0 . 2 m l 超敏 0 . 5 m l 1ml 10 μ l 2 ml 抗凝劑 EDTA EDTA EDTA 、肝素、全血、任何體液、PBMC 、精液、組織等 要求 6 小時(shí)之內(nèi)分離血漿，運(yùn)輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍。 動態(tài)范圍最大。 已獲 FDA 批準(zhǔn)。 需要時(shí)間較短。 ? 不同病毒載量檢測方法的比較見表 2 （ John 、 Joel ,Medical Management of HIV Infection 2023 Edition p15） 表 2 不同病毒載量檢測方法的比較 Roche Bayer b i o M e r i e u x 商品名 A m p l i c o r Versant N u c l i S e n s 技術(shù)原理 RT PCR bDNA NASBA 結(jié)果比較 RT PCR 試驗(yàn)的結(jié)果近似于 或 版 b D N A 試驗(yàn)的結(jié)果 bDNA 2 . 0 版或 3 . 0 版的試驗(yàn)結(jié)果與 R o c h e R T PCR實(shí)驗(yàn)的結(jié)果具有可比性 結(jié)果與 RT P C R 和 b D N A 具有可比性，但支持性資料少于前者 優(yōu)點(diǎn) / 缺點(diǎn) 與 Bayer 的方法相比假陽性較少。 ? 核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn) （ NASBA） 。 ? 3） 各區(qū)域應(yīng)備有工作人員專用的工作服或一次性工作服 、 帽子和鞋套 ， 必要時(shí)配備防護(hù)眼鏡和 /或口罩 。 ? ④ 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱 、 離心機(jī) 、 加樣器 、 電泳儀 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設(shè)備 、 廢棄物容器 、 核酸污染物處理設(shè)備等 。 ? ② 樣品處理區(qū)：冰箱 、 生物安全柜 、 離心機(jī) 、 加樣器 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設(shè)備 、 廢棄物容器 。 ? 2）各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備應(yīng)為區(qū)域性專用，開展特定試驗(yàn)時(shí)應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置專用設(shè)備。 ? （ 2） 人員 ? 進(jìn)行 HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實(shí)驗(yàn)室的上崗資格 ， 并接受過省級以上艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全及實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn) 。 ? ③ 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用 。 ? 4） 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)： ? ① 在生物安全柜內(nèi)操作 。 ? 2） 擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開 ， 須使用不同的房間 ， 兩區(qū)之間最好有一定的間隔 。 ? ③ 擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增 。 各區(qū)的功能是： ? ① 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制 、 分裝和保存 。 陰性 陽性 樣品 篩查試劑 1（高敏感性） 陽性 陰性 提供陽性咨詢 出具“ H I V 抗體陽性”報(bào)告 提供咨詢 隨訪 提供陰性咨詢 出具“ H I V 抗體陰性”報(bào)告 篩查試劑 2（高特異性） 篩查試劑 3（高特異性） 陽性 陰性 提供疑似陽性咨詢 建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗(yàn) 陽性 不確定 陰性 圖 5 替代策略 Ⅲ （一般人群 VCT策略）的檢測及結(jié)果報(bào)告流程圖 ? HIV感染診斷 （ 根據(jù)替代策略制定 ） ? 嬰兒隨訪和檢測服務(wù)流程 ? 納入當(dāng)?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng) ? 嬰兒 9~12月齡進(jìn)行 HIV抗體檢測 ? 視為 HIV抗體（ ）常規(guī)兒童保健 ? 18月齡時(shí)再進(jìn)行 HIV抗體檢測 ? 結(jié)果（ +） ? 用另一種檢測試劑再次檢測 ? 結(jié)果（ ） ? 結(jié)果（ +） ? 結(jié)果（ ） ? 對 HIV（ +）產(chǎn)婦進(jìn)行咨詢，指導(dǎo)人工喂養(yǎng) 對 H I V （ + ）產(chǎn)婦進(jìn)行咨詢，指導(dǎo)人工喂養(yǎng) 嬰兒 9~ 12 月齡進(jìn)行 H I V 抗體檢測 結(jié)果（ + ） 結(jié)果（ ） 視為 H I V 抗體（ ）常規(guī)兒童保健 18 月齡時(shí)再進(jìn)行 H I V 抗體檢測 用另一種檢測試劑再次檢測 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ + ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ + ） 用另一種檢測試劑再次檢測 結(jié)果（ + ） 確認(rèn)試驗(yàn) 結(jié)果（ + ） 納入當(dāng)?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng) HIV感染診斷 （ 根據(jù)替代策略制定 ） 嬰兒隨訪和檢測服務(wù)流程 3． HIV RNA定量測定（病毒載量測定） （ 1） 實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū) 實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)分為 4個(gè)獨(dú)立工作區(qū) ? 1） 試劑準(zhǔn)備區(qū) 、 樣品處理區(qū) 、 擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) ， 并設(shè)在不同房間 。 ? ② 第二種篩查試劑檢測陰性則用第三種篩查試劑（ 另一種高特異性試劑 ） 檢測；第二種篩查試劑檢測為陽性則按疑似陽性咨詢 ， 建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗(yàn) ， 按確認(rèn)試驗(yàn)的結(jié)果報(bào)告 。 ? ③ 下列情況均需做確認(rèn)試驗(yàn) ， 按照確認(rèn)試驗(yàn)的結(jié)果出報(bào)告：兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果一陰一陽 、 兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性但一種或二種 S/CO在 ～ 、 第三種篩查試劑檢測結(jié)果為可疑或陰性 。 ? 檢測程序及結(jié)果報(bào)告： ? ① 先用第一種篩查試劑 （ ELISA1） 檢測 ， 出現(xiàn)陰性反應(yīng)報(bào)告 HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性反應(yīng)則報(bào)告 “ HIV抗體待復(fù)查 ” ， 并用第一種和第二種酶聯(lián)試劑 （ ELISA1和 ELISA2） 復(fù)檢 。 送檢樣品 用兩種不同原理或不同廠家的試劑復(fù)測（其中包括進(jìn)口第三代 EL I SA 試劑） 進(jìn)口第三代 EL I SA 試劑復(fù)測 S/ CO 比值≥ 進(jìn)口第三代 EL I SA 試劑復(fù)測S/ CO 比值 ~ 確認(rèn)試驗(yàn) 判定陽性，上報(bào)疫情 兩種均陽性 兩種均陰性 一陰一陽 陽性反應(yīng) 陰性反應(yīng) 選用篩查試劑 陽性 陰性 不確定，隨訪 判定陰性 圖 3 替代策略 Ⅰ （ HIV感染疫情報(bào)告檢測策略）檢測流程 ? 2） 替代策略 Ⅱ （ HIV感染高流行地區(qū)高危人群VCT檢測策略 ） ? 應(yīng)在確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室或以上實(shí)驗(yàn)室指定的篩查實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行 ， 用高質(zhì)量篩查試劑檢測及判斷結(jié)果 （ 見 ） 。 ? ② 兩種試劑復(fù)測均為陽性 ， 且其中第三代 ELISA試劑復(fù)測樣品 OD值與臨界值 （ Cutoff） 的比值（ S/CO） ≥ ， 上報(bào)疫情 （ 附表 4） 。 表 1 HIV 抗體檢測的替代策略 目的 地區(qū) 人群 替代策略 艾滋病疫情報(bào)告 任何地區(qū) 任何人群 替代策略Ⅰ 高流行地區(qū) 高危人群 替代策略Ⅱ 高流行地區(qū) 一般人群 替代策略Ⅲ VCT 其它地區(qū) 任何人群 替代策略Ⅲ ? （ 1） 替代策略 Ⅰ （ 全國 HIV感染疫情報(bào)告檢測策略 ） ? 檢測程序及結(jié)果報(bào)告 ? ① 先用一種篩查試劑檢測 ， 出現(xiàn)陰性反應(yīng)則報(bào)告“ HIV抗體陰性 （ ） ” 。 器械可用 2%戊二醛消毒 。 ? ③ 溢出物： %次氯酸鈉 。 ? ① 廢棄物缸： %次氯酸鈉 。 ? ② 干燥空氣烘箱消毒 （ 干烤消毒 ） ， 140℃ ， 保持2?3h。 ? ② 從艾滋病實(shí)驗(yàn)室出來的所有廢棄物 ， 包括不再需要的樣品 、 培養(yǎng)物和其它物品 ， 均應(yīng)視為感染性廢棄物 ， 應(yīng)置于專用的密封防漏容器中 ， 安全運(yùn)至消毒室 ， 并在高壓消毒后再進(jìn)行處理或廢棄 。 ? ② 實(shí)驗(yàn)室主任和設(shè)備安全員要遵循有關(guān)規(guī)定 ， 報(bào)告 、 調(diào)查和處理突發(fā)事件以及可能發(fā)生的意外職業(yè)暴露 。 ? 各級實(shí)驗(yàn)室血清庫 /毒種庫的設(shè)置按有關(guān)規(guī)定執(zhí)行 。 ? 5） 對存放試劑和有毒物區(qū)域的監(jiān)控 ? ① 冷藏柜 、 冰箱 、 培養(yǎng)箱和存放生物試劑 、 化學(xué)危險(xiǎn)品 、 放射性物質(zhì)的容器置于工作人員視線之外的地點(diǎn)時(shí)應(yīng)上鎖 。 ? 4） 嚴(yán)格質(zhì)量管理 ? ① 按要求做好安全操作的管理以及檢測試劑的選擇 、 檢測工作的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評 。 不可對無關(guān)人員透露檢測結(jié)果 。 ? 3） 建立嚴(yán)格的保密制度并定期檢查 ? ① 與 HIV/AIDS相關(guān)檢測項(xiàng)目的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格保密 ， 包括送檢單與檢測記錄的保管 、 報(bào)告單的發(fā)放和工作人員年度采血檢測等 。 ? ⑤ 嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室工作人員年度采血檢測 HIV抗體和備案制度 ， 工作人員血清應(yīng)長期保留 。 ? ④ 新調(diào)入人員 、 外來合作 、 進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前必須經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室主任的批準(zhǔn) 。 ? ③ 實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)了解所有工作人員 。 實(shí)驗(yàn)室的安全責(zé)任人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé) ， 所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全 。 強(qiáng)化全員安全培訓(xùn)和 “ 普遍性防護(hù)原則 ” 安全意識 。 ? ⑤ 實(shí)驗(yàn)室主任負(fù)責(zé)組織對突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進(jìn)行調(diào)查 、 登記 、 處理和報(bào)告 。 ? ④ 制定意外事故處理預(yù)案 。 ? ② 根據(jù)本 《